【摘 要】
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硬脂酰辅酶A去饱和酶1(Stearoyl-Co A desaturase1,SCD1)是一种脂肪生成酶,是调节脂肪代谢的潜在靶点。SCD1可将脂肪酸从头合成途径产生的棕榈酸和硬脂酸去饱和生成棕榈油酸和油酸,通过调节不饱和脂肪酸的含量参与脂肪代谢。根据已有报道,SCD1基因可以同时受多个miRNAs的调节。但这些研究主要集中在人、鼠、鱼和猪等物种中,在绵羊中鲜有报道。因此,本研究旨在预测并验证与SC
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硬脂酰辅酶A去饱和酶1(Stearoyl-Co A desaturase1,SCD1)是一种脂肪生成酶,是调节脂肪代谢的潜在靶点。SCD1可将脂肪酸从头合成途径产生的棕榈酸和硬脂酸去饱和生成棕榈油酸和油酸,通过调节不饱和脂肪酸的含量参与脂肪代谢。根据已有报道,SCD1基因可以同时受多个miRNAs的调节。但这些研究主要集中在人、鼠、鱼和猪等物种中,在绵羊中鲜有报道。因此,本研究旨在预测并验证与SCD1具有靶标关系的关键miRNAs,探究miRNAs对绵羊皮下脂肪细胞中SCD1的调节作用,以期为通过增加不饱和脂肪酸的含量而改善绵羊肉质品质提供科学依据。利用4个生物信息学软件Target Scan、mir DB、Star Base和miRanda预测与SCD1具有靶标关系的miRNAs。利用双荧光素酶试验验证miRNAs与SCD1之间的靶标关系。利用qPCR和Western-blotting技术,分别在转录水平和蛋白水平上探究miRNAs对SCD1表达的调节作用。主要结果如下:(1)4个生物信息学软件预测出与SCD1有靶标关系的miRNAs分别是:mir DB有113个,Starbase有41个,Miranda有39个,Targetscan有8个。韦恩图取交集后发现与SCD1有结合位点的miRNAs有3个,分别是miR-200c、miR-429和miR-216a。经过初步筛选,选择miR-200c和miR-429作为本试验的研究对象。miR-200c和miR-429种子区序列均与与SCD1 3’UTR的第1395～1401碱基完全互补,即具有同一个结合位点。(2)双荧光素酶试验结果显示,过表达组(共转染pmir-SCD1和miR-200c mimic或miR-429 mimic)的荧光活性显著(P<0.05)地低于阴性对照组。表明miR-200c和miR-429均与SCD1具有靶标关系。(3)qPCR和Western-blotting试验结果显示,过表达组(转染miR-200c mimic或miR-429 mimic)下调了SCD1在m RNA(P<0.05)和蛋白水平(P<0.01)上的表达;抑制表达组(转染miR-200c inhibitor或miR-429 inhibitor)上调了SCD1在m RNA(P<0.05)和蛋白水平(P<0.01)上的表达。表明miR-200c和miR-429均抑制了绵羊皮下脂肪细胞中SCD1的表达。共转染miR-200c mimic和miR-429 inhibitor组与NC组差异极显著(P<0.01),而共同转染miR-200c inhibitor和miR-429 mimic的组与NC组差异不显著(P>0.05)。表明miR-200c的作用较miR-429更强。(4)显微镜下观察脂滴状态发现,过表达组(转染miR-200c mimic或miR-429mimic)的脂滴数少于阴性对照组,更少于相应的抑制表达组(转染miR-200c inhibitor或miR-429 inhibitor)。表明miR-200c和miR-429均可抑制绵羊皮下脂滴的生成。综上所述,本研究验证了miR-200c和miR-429与SCD1具有靶标关系,且具有同一个结合位点;阐明了miR-200c和miR-429抑制绵羊皮下脂肪细胞中SCD1的表达,且miR-200c的调节作用更强。有关结果为调控不饱和脂肪酸的代谢,改善肉品质提供了科学依据。
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