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本研究通过建立犬下颌骨镍钛记忆合金牵张成骨模型,检测HIF-1α及下游基因VEGF的表达情况,试图初步探讨HIF-1α在颌骨持续牵张成骨中促进血管生成的作用机制。
研究目的:
1.建立镍钛记忆合金牵张成骨修复犬下颌骨矩形缺损动物模型。
2.研究HIF-1α在犬下颌骨镍钛记忆合金牵张成骨中的表达特点及在血管生成中的作用。
研究材料和方法:
1.镍钛记忆合金牵张器修复犬下颌骨矩形缺损动物模型的建立健康成年雄性Beagle犬2只,于双侧下颌骨体人为制造下颌骨矩形缺损,同期形成传送盘,右侧行颊舌侧完全截骨术,左侧行保留部分舌侧骨皮质的骨皮质切开术,安置镍钛记忆合金牵张器。术后第1、4、7天拍摄X线片观察牵张情况,术后第9周处死动物,并拍摄X线片,取新生骨痂组织进行组织病理学检查,观察双侧牵张区新骨生成情况。
2.犬下颌骨镍钛记忆合金牵张模型中HIF-1α及VEGF的表达选健康成年Beagle犬12只,随机分为实验组10只和空白对照组2只。实验组于双侧下颌骨体人为制造下颌骨矩形缺损,建立镍钛记忆合金牵张动物模型。空白对照组不实施手术。实验组分别于术后第1天、第4天、第7天、第10天、第15天各处死2只动物,第15天同时处死空白对照组2只动物。取双侧牵张区组织,RT-PCR检测HIF-1αmRNA表达、免疫组化检测HIF-1α及VEGF蛋白的表达,CD34标记内皮细胞检测新生微血管密度。
研究结果:
1.镍钛记忆合金牵张器修复犬下颌骨节段性缺损动物模型的建立左侧(保留部分舌侧骨皮质)牵张区形成新生骨质,传送盘与近中牵张区形成骨性连接,组织学检查符合膜内成骨。右侧即颊舌侧完全截骨侧牵张区未见新骨形成,传送盘移位。
2.犬下颌骨镍钛记忆合金牵张模型中HIF-1α及VEGF的表达RT-PCR及免疫组化显示HIF-1α在术后第4、7、10、15天呈阳性表达,随时间推移呈上升趋势,术后第7天表达水平最高,主要定位于骨切开界面附近的成骨细胞胞核及胞浆上。VEGF在牵张过程中主要在牵张区内皮细胞和成骨细胞内表达,表达趋势与HIF-1α一致,术后第10天达最大。新生微血管密度在牵张期逐渐升高,术后第7天达峰值,各组间比较差异均有统计学意义。
研究结论:
1.采用保留部分舌侧骨皮质的截骨方式可成功建立正常犬下颌骨矩形缺损牵张成骨动物模型。
2.HIF-1α在犬下颌骨持续牵张成骨中可能通过上调VEGF的表达,参与血管生成过程,牵张末期是其发挥作用的关键时期。