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目的:survivin是近年来发现的凋亡抑制蛋白(IAP)家族中的新成员,是目前发现的最强的凋亡抑制因子,并且survivin广泛高表达于人类大多数恶性肿瘤组织中,在正常组织很少表达或不表达。有研究表明,该因子通过抑制肿瘤细胞凋亡,在肿瘤的形成和发展中起着重要的作用。本研究通过使用不同浓度化疗药物吡柔比星(Pirarubicin,THP)作用人膀胱癌T24细胞一定时间后,检测T24细胞的细胞增殖情况,并检测Survivin mRNA和Survivin蛋白在不同浓度化疗药物作用下细胞中的表达水平,探讨Survivin在THP诱导人膀胱癌T24细胞凋亡过程中的作用机制和原理,为吡柔比星在临床上膀胱癌的灌注治疗中提供一定的理论依据,并为膀胱癌的发生发展以及分子靶向治疗提供一定的理论基础。方法:1.配置成不同终浓度的THP(0μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml),分别作用于人膀胱癌T24细胞一定时间,在设置空白对照组以及各药物实验组的前提下,应用MTT法检测不同浓度THP对人膀胱癌T24细胞分别作用24、48、72小时后增殖抑制率的影响。2.应用RT-PCR方法检测在不同浓度(0、0.1、1、10μg/ml)THP处理膀胱癌T24细胞24小时后,T24细胞中Survivin mRNA的表达水平。3.应用Western-blot蛋白印迹技术检测人膀胱癌T24细胞在不同浓度(0、0.1、1、10μg/ml)THP处理24小时后,T24细胞中Survivin蛋白的表达水平变化。应用SPSS.13.0统计软件进行统计学分析,数据以“均值±标准差”(X±s)表示。两样本均数比较采用t检验,多样本均数比较采用完全随机的单因素(One-ANOVA)方差分析。P<0.05表示具有差异,有统计学意义,P<0.01表示差异显著。结果:1.经MTT法检测空白组、24h,48h,72h四组细胞在药物作用后各组的OD值,根据测得的OD值,比较各组细胞生长情况。与对照组比较,各组浓度的THP在24h,48h,72h均可以抑制膀胱癌T24细胞的增殖,差异具有统计学意义(P<0.05),计算加入药物组24h,48h,72h增殖抑制率,发现其抑制率呈现一定的浓度及时间依赖性(P<0.05)。2.不同浓度(0、0.1、1、10μg/ml)THP处理T24细胞24小时后,均使Survivin mRNA的表达明显下调,并表现为一定的浓度依赖性(P<0.01)。3.应用western-blot检测不同浓度THP作用膀胱癌T24细胞24小时后,各组不同浓度间Survivin蛋白质的表达显著下调,并且具有一定的浓度依赖性,随着药物浓度的升高,Survivin蛋白下调的更加明显,表现出一定范围的浓度依赖性(P<0.05)。结论:吡柔比星在体外的细胞实验中,对膀胱癌T24细胞有明显的抑制作用,并且具有一定的浓度和时间依赖性。即随着THP浓度的升高和作用时间的延长,吡柔比星对T24细胞的抑制作用更加明显。在THP对膀胱癌T24细胞的体外抑制实验中,survivin mRNA和survivin蛋白质随着化疗药物THP对T24细胞作用的增强,即THP浓度的升高和作用时间的延长,survivin mRNA和survivin蛋白质的表达下降的更加明显,表现出一定的浓度和时间的依赖性。综上所述,THP很可能是通过下调survivin凋亡抑制因子的表达这条通路来促使T24细胞的凋亡,在上述原理下来达到抑制膀胱癌T24细胞的生长的。