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目的:从细胞水平,探讨与验证Foxp3基因启动子区甲基化在砷对人淋巴细胞免疫调节作用中的影响,并进行针对性干预,以期为砷中毒机制的完善、寻找可靠的干预措施提供科学依据。方法:（1）染毒试验:密度梯度法分离培养健康成人外周血淋巴细胞,用0.00、5.00、10.00、20.00、30.00、40.00μmol/L的亚砷酸钠（Sodium arsenite,NaAsO2）染毒24 h,MTT比色法检测细胞相对存活率,HE染色鉴定染毒模型;实时荧光定量（RT-qPCR）检测叉头转录因子3（forkhead/winged helix transcription factor,Foxp3）,DNA甲基转移酶1（DNA methltransferases1,DNMT1）mRNA的转录水平;免疫印迹法（Western blot）检测Foxp3、DNMT1的蛋白表达水平。亚硫酸氢盐（BisμLfite sequencing,BSP）测序法检测Foxp3基因启动子区域甲基化状态,流式细胞分析仪检测调节性T细胞（regμLatory T cell,Treg）占CD4+T细胞比例;酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测白细胞介素-10（Intedeukin-10,IL-10）、白细胞介素-35（Intedeukin-15,IL-35）水平。（2）干预试验:设置对照组（不进行任何处理）、染砷组（20μmol/L NaAsO2）、砷+5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR）组（20μmol/LNaAsO2+5.00μmol/L5-Aza-CdR）、5-Aza-CdR处理组（5.00μmol/L 5-Aza-CdR）。Western blot检测Foxp3及DNMT1基因的蛋白表达水平,BSP测序法检测Foxp3基因启动子区甲基化状态,流式细胞分析仪检测Treg占CD4+T细胞比例,ELISA法检测IL-10、IL-35水平。结果:1.染毒试验:（1）NaAsO2染毒对淋巴细胞存活率的影响:随着NaAsO2染毒浓度的升高,各染毒组淋巴细胞存活率呈下降趋势(r淋巴细胞存活率=-0.96,P<0.05),与对照组相比,各染毒组细胞存活率均降低,差异均具统计学意义（P<0.05）。（2）NaAsO2染毒对Foxp3、DNMT1基因表达的影响:与对照组相比,各染毒组淋巴细胞Foxp3基因的mRNA及蛋白表达水平皆明显下降（P<0.05）,而DNMT1的mRNA及蛋白表达水平皆明显升高（P<0.05）。（3）NaAsO2染毒对Foxp3基因启动子区甲基化率的影响:0.00、5.00、10.00、20.00、30.00μmol/LNaAsO2染毒组中Foxp3基因启动子区甲基化率分别为1.3%（1/80）、5.0%（4/80）、12.5%（10/80）、77.5%（62/80）、87.5%（70/80）,除5.00μmol/L NaAsO2染毒组外,其余染毒组Foxp3基因启动子区甲基化率皆明显高于对照组（P<0.0125）。（4）NaAsO2染毒对Treg细胞比例的影响:与对照组相比,10.00μmol/L及以上剂量NaAsO2染毒组的Treg细胞占CD4+T细胞比例降低,差异有统计学意义（P<0.05）。（5）NaAsO2染毒对IL-10、IL-35的影响:与对照组相比,10.00μmol/L及以上染毒组的淋巴细胞中IL-10的水平降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较,20.00μmol/L及以上剂量组中IL-35水平才出现明显降低（P<0.05）。2.干预试验:（1）5-Aza-CdR干预对Foxp3基因蛋白表达的影响:与对照组相比,染砷组、砷+5-Aza-CdR组中Foxp3基因蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与染砷组相比,砷+5-Aza-CdR组中Foxp3基因蛋白表达水平则明显增加（P<0.05）。（2）5-Aza-CdR干预对DNMT1基因的蛋白表达影响:与对照组相比,染砷组DNMT1基因蛋白表达水平明显增加,砷+5-Aza-CdR组DNMT1基因蛋白表达水平则明显降低（P<0.05）;与染砷组相比,砷+5-Aza-CdR组中DNMT1蛋白表达水平降低,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）5-Aza-CdR干预对Foxp3基因启动子区甲基化的影响:对照组、染砷组、砷+5-Aza-CdR组、5-Aza-CdR组Foxp3基因启动子区甲基化率分别为2.5%（2/80）、76.3%（61/80）、57.5%（46/80）、3.8%（3/77）;与对照组相比,染砷组、砷+5-Aza-CdR组中Foxp3基因启动子区甲基化率明显增加,差异有统计学意义(χ2对照组与染砷组=91.141,χ2对照组与砷+5-Aza-CdR组=57.619,P均<0.018);与染砷组相比,砷+5-Aza-CdR组中Foxp3基因启动子区DNA甲基化率明显降低（χ2=6.348,P<0.018）。（4）5-Aza-CdR干预对Treg细胞比例的影响:与对照组相比,染砷组、砷+5-Aza-CdR组中Treg细胞占CD4+T细胞的比例明显降低（P<0.05）;与染砷组相比,砷+5-Aza-CdR组中Treg细胞占CD4+T细胞比例明显增加（P<0.05）。（5）5-Aza-CdR干预对IL-10、IL-35的影响:与对照组相比,染砷组、砷+5-Aza-CdR组中IL-10、IL-35表达水平明显降低（P<0.05）;与染砷组相比,砷+5-Aza-CdR组中IL-10及IL-35表达水平则明显增加（P<0.05）。结论:1.NaAsO2体外染毒人淋巴细胞后,可诱导DNMT1高表达,上调Foxp3基因启动子区甲基化水平,从而抑制Foxp3基因的转录、表达,导致Treg细胞数量及相关抗炎因子分泌降低,抗炎作用减弱,此可能是砷中毒免疫功能紊乱的基础。2.5-Aza-CdR可通过抑制DNMT1的表达,有效回复NaAsO2致人淋巴细胞Foxp3基因启动子区高甲基化,从而上调Foxp3基因的蛋白表达水平。3.5-Aza-CdR干预能刺激Treg细胞活化,促进抗炎因子分泌,可在一定程度回复其抗炎及免疫调控功能。