【摘 要】
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该实验首先以大鼠为研究模型,利用半定量逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测及分析大鼠在胚胎时期、出生后早期、成年时期各重
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该实验首先以大鼠为研究模型,利用半定量逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测及分析大鼠在胚胎时期、出生后早期、成年时期各重要脏器PLCG1在mRNA水平上的时空表达变化,探讨PLC-γ 1在转录水平对大鼠的生长发育过程的调控作用的影响.同时,采用RT-PCR、序列分析等方法对大鼠PLC-γ 1的前体mRNA的剪接方式做初步探讨,为进一步研究它们在不同的组织、不同的生长发育阶段中的表达及其功能机制奠定工作基础.结论:一、在大鼠不同的发育及生长阶段包括胚胎时期、出生早期、成年时期,肝、肺、肾、脑四种重要脏器组织中,PLCG1在转录水平的表达均较强;并且各时期之间的表达有显著性差异;而在同一时期4种不同的组织间PLCG1的表达也有显著性差异.因此,同一脏器组织在不同的发育时期及在同一时期不同脏器组织之间的PLCG1的差异性表达提示了通过对转录水平mRNA表达量的影响及mRNA稳定性的调节,PLCG1的基因表达调控过程对大鼠生长发育过程中细胞的增殖与分化起着重要作用.二、从现有已分析的21份样品中尚未发现与人类相似的第一种剪接方式(PLC-γ 1a),这一实验结果表明:(1)导致这一结果可能因样品涵盖量不够;(2)如果存在两种剪接,其中一种表达占优势,而另一种只是微量表达,在PCR时表达占优势的剪接体扩增占优,从而可能导致假阴性;(3)由于不同物种之间的差异,在大鼠中可能不存在与人类已发现的PLC-γ 1前体mRNA相似的选择性剪接方式;在大鼠中PLC-γ 1转录后的剪接主要以与人类相似的第二种剪接方式(PLC-γ 1b)为主;(4)大鼠中PLC-γ 1的选择性剪接位点可能与人不同而位于其它位点.
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