【摘 要】
：
番茄白粉病的发生随着番茄栽培面积的扩大也日益严重,严重影响了番茄的产量和品质。植物MLO基因家族中的部分成员是白粉病的感病因子,MLO基因发生的隐性突变mlo可赋予植物对白粉病菌广谱抗性,在抗病育种中发挥极其重要的作用。课题组前期研究结果显示SlMLO4为番茄感白粉病相关基因,但目前关于白粉菌胁迫下番茄酵母cDNA文库的构建以及SlMLO4互作蛋白的研究鲜见报道。本研究以感白粉病番茄品种‘Mone
【基金项目】
：
国家自然科学基金地区科学基金项目“番茄SlMLO4参与白粉菌胁迫应答的机制研究”（31860561）；
论文部分内容阅读
番茄白粉病的发生随着番茄栽培面积的扩大也日益严重,严重影响了番茄的产量和品质。植物MLO基因家族中的部分成员是白粉病的感病因子,MLO基因发生的隐性突变mlo可赋予植物对白粉病菌广谱抗性,在抗病育种中发挥极其重要的作用。课题组前期研究结果显示SlMLO4为番茄感白粉病相关基因,但目前关于白粉菌胁迫下番茄酵母cDNA文库的构建以及SlMLO4互作蛋白的研究鲜见报道。本研究以感白粉病番茄品种‘Moneymaker（MM）’和抗白粉病番茄自交系‘62579’为材料,筛选出番茄在白粉菌胁迫下qRT-PCR中最稳定的内参基因,对MM番茄SlMLO4基因受白粉菌诱导后不同时间点的表达谱进行研究,并以接种O.neolycopersici后SlMLO4基因表达量最高时间点的MM番茄叶片为材料,通过gateway方法构建核体系及膜体系番茄酵母cDNA文库,利用酵母双杂交技术筛选膜体系番茄酵母cDNA文库,在NCBI网站对阳性质粒测序结果进行Blast比对分析,筛选出与SlMLO4互作的候选靶蛋白,再挑选部分候选靶蛋白通过酵母回转试验进行初步验证。研究结果如下:1、综合geNorm、NormFinder和BestKeeper三个软件分析结果,番茄在白粉菌胁迫下的较稳定内参基因为L33和EF1α。针对感白粉病番茄MM,Act和GAPDH为较稳定内参基因;针对抗白粉病番茄62579,较稳定内参基因为Act、EF1α和L33。2、番茄MM在O.neolycopersici诱导下SlMLO4基因表达谱研究表明:SlMLO4基因在O.neolycopersici诱导后72 h表达量达到最高,约为0 h的2.5倍。3、以接种白粉菌0 hpi、6 hpi和72 hpi的MM番茄叶片为材料,通过gateway方法构建番茄酵母cDNA文库,初级文库总库容为1.2×107CFU,重组率为100%,平均插入片段长度大于1000 bp;通过LR重组反应构建核次级文库及膜次级文库,核次级文库总库容为1.6×107 CFU,重组率为100%,平均插入片段长度大于1000 bp;膜次级文库总库容为1.04×107 CFU,重组率为100%,平均插入片段长度大于1000 bp;初级及次级文库均达到文库质检标准,可以用于酵母双杂交筛库试验。4、质粒测序结果证明,pBT3-STE-SlMLO4诱饵载体构建成功,无移码突变。诱饵载体自激活检测及功能验证结果显示,诱饵蛋白在NMY51酵母菌中可以正确表达,并且不存在自激活性,即构建的诱饵载体功能验证通过,可以用于酵母双杂交筛库试验。5、酵母双杂交筛选番茄膜体系酵母cDNA文库,获得了 26个可能与SlMLO4互作的候选靶蛋白,这些候选靶蛋白大部分定位在叶绿体或质膜上,只有glycine-rich cell wall structural protein定位在细胞壁上、12-oxophytodienoate reductase 1定位在细胞质中。另外,以上大部分候选靶蛋白都含有跨膜螺旋结构,数量为1-11个不等。6、酵母回转验证结果显示,60S ribosomal protein L18a-like protein 和 PLAT domain-containing protein 2 与 SlMLO4 互作存在假阳性可能,初步确定 vacuolar-sorting receptor 1-like isoform X1、sodium/calcium exchanger NCL、K（+）efflux antiporter 2、Golgi SNAP receptor complex member 1-2、SEC12-like protein 1、ATP synthase I-like protein、V-type proton ATPase 16 kDa proteolipid subunit、glycine-rich cell wall structural protein、photosystem Ⅱ subunit S 和 tetraspanin-19 共 10 个靶蛋白与SlMLO4存在互作。上述研究结果为进一步确定SlMLO4基因与靶蛋白基因的调控关系、探索其与靶蛋白基因在番茄与白粉菌互作过程中的响应机制奠定理论基础,同时为番茄的广谱抗性育种提供理论依据。
其他文献
土壤盐渍化严重制约着农业生产,同时也阻碍着区域生态恢复与可持续发展,但盐渍化土壤作为一种资源对高品质农业发展有着重要作用。硒是人体和动物必需的微量营养元素,富硒农产品的开发利用是高品质农业发展的方向之一。宁夏银北引黄灌区约有三分之一的耕地呈现不同程度的盐渍化,最新地勘数据表明银北引黄灌区富硒土壤与盐渍化土壤分布高度重合。前人研究发现硒元素在盐碱土壤中呈现更高的有效性,如何有效利用宁夏引黄灌区盐碱富
三氟甲基吡啶羧酸类配体具有配位能力强、稳定性高等优点。研究此类配体及相应的配合物与小牛胸腺DNA（CT-DNA）和牛血清白蛋白（BSA）的作用模式、结合位点等,对生物大分子结构探针的开发具有参考价值。因此制备新型金属配合物分析其结构、性质及对生物大分子的作用显得尤为重要。这类研究有望为合理地设计和开发药物分子提供支持。论文的工作内容如下:1、选取5-三氟甲基（吡啶）-2-甲酸（Htpc）为配体与稀
近年来,全球性的环境污染和能源危机日益严重,加快能源转换和开发新型储能设备越来越迫在眉睫。锂离子电池凭借其高能量密度和长循环寿命在全球的新能源电池市场上取得了巨大的成功,但是其昂贵的价格、有限的地球储量以及安全性等问题限制了其大规模应用。水系锌离子电池因具有价格低廉、安全性高且环境友好等优点越来越受关注。目前,水系锌离子电池的发展主要受限于正极材料,其中锰基材料由于容量高、成本低、环境友好等优点被
气化是煤炭资源高效利用的重要途径之一,高温条件下煤灰的熔融特性对气化炉安全运行的影响至关重要。针对实际生产过程中煤灰熔融温度（AFTs）过高的问题,通常采用添加助熔剂以及配煤的方式来改善此类煤灰的高温流动特性,达到气化炉运行要求。本文利用灰熔融测定仪、灰化设备、X射线荧光分析仪（XRF）、X射线衍射仪（XRD）、扫描电子显微镜（SEM）以及热力学软件FactSage等技术手段对我国西部三种典型气化
辅导员作为大学生思想政治教育的骨干力量，在“三全育人”综合改革试点工作深入推进过程中承担着重要职责，被赋予新的角色。实际工作中，对辅导员日常思想政治教育组织者、实施者、指导者的狭义解读，工作职能“全能属性”的曲解，工作内容的事务化倾向与“三全育人”理念产生一定背离，是阻碍辅导员实现角色转型的瓶颈。因此，高校应加强政策落实，完善体系建设，明确职业导向，助力辅导员完成角色定位。
金属-有机框架（MOFs）是由金属节点和有机配体构成的多孔配位聚合物,由于其多样化的拓扑结构、多种组成成分、高比表面积且孔表面容易功能化而受到广泛关注。其中MOFs的模块化特性使它们具有良好的可调性,MOFs的构建受许多因素的影响,例如反应温度、pH值、金属配体比和溶剂体系等。本文选择具有多功能位点的半刚性的2-（4-吡啶基）-对苯二甲酸作为主配体,乙二酸作为辅助配体与镧系金属离子Eu（Ⅲ）、Gd
煤着火特性研究是实现煤高效和清洁利用的理论基础,煤中所含的K和Na等碱金属在燃烧过程中释放到气相中并进入系统容易引起反应器高温腐蚀、受热面结垢和炉内结渣等问题。单颗粒煤燃烧形式简单,其相关研究结果可以更好地揭示煤着火特性。本文基于单颗粒煤着火燃烧系统,采用光学诊断技术对单颗粒羊场湾（YCW）烟煤和淖毛湖（NMH）褐煤的着火特性及碱金属Na*和K*释放特性进行了研究。主要分析了不同条件下煤颗粒从着火
商业化的石墨由于其比容量低和倍率性能差等缺点已无法满足大众需求,因此寻求更高性能的锂离子电池（Lithium Ion Batteries,LIBs）负极材料成为研究的重点方向。硅（Silicon,Si）和锗（Germanium,Ge）作为锂合金型负极材料,具有较高的理论比容量和适中的电压平台而引起广泛关注。然而,由于Ge和Si负极材料在（去）锂化过程中巨大的体积效应严重限制了其大规模应用。为了充分
光电化学（PEC）分解水制氢技术可以将太阳能转换为清洁、经济的氢能,从而缓解化石能源危机,解决环境污染问题。光阳极作为承载该技术的核心部分之一,一直以来都是人们广泛关注与研究的热点。钒酸铋（BiVO4）作为一种n型间接窄带隙半导体,具有以下优点:原料丰富、价格低廉且无毒无害、形貌可控、在可见光区具有较强的光活性以及具有用于分解水较为合适的禁带宽度等,因此被认为是一种理想的光阳极材料。然而,由于Bi
脱羧反应广泛应用于化工、医药等领域,利用脱羧反应可以制备许多医药和化工中间体。脱羧反应主要有热化学脱羧、金属催化剂脱羧、光化学脱羧、电化学脱羧等方法。而本论文主要研究了电化学脱羧氧化反应在构建碳杂原子间的应用,研究了脱羧生成阳离子与分子内叠氮及甲醇反应生成吡咯啉和甲基醚。论文包括三个部分:1.电化学脱羧偶联方法概述;2.电化学氧化脱羧生成甲基醚。3.电化学氧化脱羧生成吡咯啉。论文首先介绍了电化学脱