【摘 要】
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前言 1型糖尿病（T1DM）是一种由于胰岛β细胞的自身免疫性损伤导致胰岛素分泌的绝对缺乏,而引起的代谢障碍性疾病。由于其是单一蛋白质—胰岛素缺乏所致的代谢障碍,从而成为
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前言 1型糖尿病（T1DM）是一种由于胰岛β细胞的自身免疫性损伤导致胰岛素分泌的绝对缺乏,而引起的代谢障碍性疾病。由于其是单一蛋白质—胰岛素缺乏所致的代谢障碍,从而成为基因治疗的适应症。通过基因转移技术将人胰岛素原基因导入糖尿病患者体内,以产生长期、稳定、按生理模式分泌的胰岛素,从而达到永久治疗的目的。但是该基因转入糖尿病患者体内或动物体内之前,必须在体外证明该重组人胰岛素原基因具有长期、稳定、按生理模式调节胰岛素分泌的能力。本实验通过把含重组人胰岛素原基因的质粒以逆转录病毒为载体转入大鼠肝癌细胞CBRH7919,筛选出含有重组胰岛素原基因的肝癌细胞,并检测该种细胞转染后38h及转染后1个月在不同葡萄糖浓度下其胰岛素的分泌情况。为下一步的动物水平实验打下基础。 本实验的目的是: 1 掌握细胞培养、复苏及冻存技术。 2 掌握基因转染技术及鉴定方法。 3 测定不同葡萄糖浓度下肝癌细胞在转染后38h及稳定表达后胰岛素的分泌情况。 4 掌握从细胞中提取DNA、PCR扩增目的DNA及电泳技术。 材料与方法 一、材料 1.大鼠肝癌细胞株CBRH7919细胞,购自中科院上海细胞生物研究所。 2.含有二点突变的胰岛素原基因重组质粒（GLRE）,BP-1-INS2及含
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