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血液是生物体的一个重要组成部分,担负着运输、防御、维持内环境稳定等重要生理功能。这些生理功能能否正常发挥,完全取决于血液组成成分的含量或其他性质是否处在正常水平。毛细管电泳因其诸多优点,日益在生物学领域得到广泛应用,但UV检测的高检测限一定程度上又限制了毛细管电泳的深入应用。本论文通过采用合适的在线富集技术和有效的样品前处理方法,进一步扩展了毛细管电泳技术在复杂生物体系血液中的应用,具体研究内容如下:
1、建立了重要异黄酮染料木素的在线酸坝富集毛细管电泳测定方法。详细研究了酸坝种类、酸坝酸度、酸坝浓度以及进样/进酸时间比例四个关键因素对染料木素富集效果的影响。在优化实验条件下,实现了染料木素检测灵敏度300倍的提高。将所建实验方法成功用于槐角样品中染料木素的测定,回收率在92.2%-102.1%之间。将所建方法用于人体血浆中染料木素的测定,血浆内源性物质会产生干扰。通过调节进样/进酸时间比例,能够很好地使干扰物与染料木素基线分离,并且实现血浆中染料木素检测灵敏度50倍的提高。将调整后的毛细管电泳方法用于测定健康志愿者血浆中染料木素的含量,结果令人满意。
2、建立了K+、Na+、Mg2+、Ca2+和Zn2+五种金属阳离子的毛细管区带电泳间接紫外检测方法。研究了紫外吸收试剂咪唑的浓度、络合试剂酒石酸的浓度以及缓冲溶液的pH对金属阳离子分离的影响,还特别研究了咪唑浓度对金属阳离子谱峰面积的影响。实验发现,咪唑浓度对金属离子的谱峰面积有显著影响。在优化的实验条件下,6min内即可实现五种金属离子的基线分离。将所建实验方法戒功用于人红细胞消化液及血浆中金属离子的分离测定,测得结果得到原子吸收光谱实验的验证。
3、提出了一种用于完整红细胞毛细管电泳实验中的红细胞洗涤方法。用含2%蛋清白蛋白的洗涤液洗涤红细胞,不用添加HPMC,不用高离子强度的缓冲溶液,就能有效消除红细胞的嗜线性。实验中还优化了缓冲溶液pH和浓度、工作电压和毛细管内径对红细胞峰形的影响。在优化的条件下,4min的时间内便可观察到红细胞的对称谱峰。应用所建红细胞毛细管电泳方法,初步对甲醛溶液是否影响红细胞表面电性质进行了考察。实验发现,该刺激虽不能显著改变红细胞的出峰时间,但对红细胞的峰形存在影响,肩峰的出现说明在该刺激的作用下,部分红细胞的电泳行为发生了改变。