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背景:胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,目前胃癌的治疗存在疗效不佳等问题。深入研究胃癌发生发展的分子机制对于胃癌的诊疗有着重要意义。肌钙蛋白T1（TNNT1）是编码肌钙蛋白复合物的三个亚基之一,近年来有研究报道TNNT1可能参与了多种肿瘤的调控,而关于TNNT1是否调控胃癌进展的研究尚无报道。本研究首先通过生物信息学分析验证了TNNT1在胃癌中的表达与肿瘤的关系,再在细胞水平、组织水平、动物水平进行实验验证其可能存在的胃癌调控关系,最后探索可能导致TNNT1调控胃癌进展的分子机制并进行实验验证。本研究可能在未来有助于胃癌的诊疗。方法:1.TNNT1的生物信息学分析及验证:1)使用TCGA数据库、TIMER 2.0数据库、Kaplan-Meier Plotter数据库分析TNNT1基因在胃癌组织中的表达及预后情况;2)使用免疫组化、q RT-PCR、Western Blot检测新鲜胃癌组织中TNNT1的表达情况以验证生物信息学分析,并分析免疫组化评分与临床病理特征之间的相关性。2.TNNT1的表达对胃癌细胞生物学功能的影响:1)利用重组慢病毒载体构建稳定表达的TNNT1干扰组/过表达组胃癌细胞模型,并使用q RT-PCR、Western Blot法检测转染效率;2)使用CCK-8法、平板克隆实验以及生物信息学分析KI67与TNNT1表达的相关性,以分析TNNT1的表达对胃癌细胞增殖的影响;3)使用划痕实验、Transwell细胞迁移及侵袭实验验证TNNT1的表达对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响;4)利用裸鼠成瘤实验、免疫组化分析在体内水平研究TNNT1的表达对于胃癌细胞增殖的影响。3.TNNT1调控胃癌进展的机制探索:1)通过GSEA富集分析筛选TNNT1调控胃癌进展的可能的分子机制,并在蛋白水平验证假设;2)使用通路抑制剂处理过表达模型细胞,通过CCK-8法、Transwell迁移及侵袭实验分析通路抑制剂对模型细胞生物学功能的影响;3)在蛋白水平验证通路抑制剂对模型细胞蛋白表达的影响。4.TNNT1相关预后分子的初步探索:1)Pearson相关性检验提取与TNNT1基因有共表达关系的基因并进行表达差异分析;2)SVM-RFE机器学习算法以及LASSO回归分析筛选TNNT1相关预后分子。结果:1.TNNT1在胃癌中表达上调并与胃癌患者的病理分期及预后相关:1)TIMER 2.0数据库的泛癌分析表明,TNNT1在多种肿瘤中表达上调,TCGA数据库及Kaplan-Meier Plotter数据库分析表明TNNT1基因在胃癌中表达上调,且TNNT1的高表达与胃癌患者的差预后相关;2)免疫组化、q RT-PCR、Western Blot结果验证了生物信息学分析的结果,并提示TNNT1的高表达与胃癌较晚的病理分期有关。2.TNNT1促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭:1)CCK-8法及平板克隆实验表明TNNT1可以促进胃癌细胞的增殖能力,相关性分析表明TNNT1的表达与KI67的表达呈正相关;2)划痕实验、Transwell迁移及侵袭实验表明TNNT1可以促进胃癌细胞迁移及侵袭的能力。3.TNNT1调控JAK2/STAT3轴促进胃癌细胞的进展:1)GSEA富集分析提示TNNT1在胃癌中的表达上调可能会激活JAK-STAT通路,Western Blot实验表明JAK2/STAT3信号轴相关蛋白表达水平随TNNT1表达水平的改变而改变;2)CCK-8法、Transwell迁移及侵袭实验表明,JAK激酶抑制剂AG490处理后的过表达模型细胞的增殖、迁移及侵袭能力下降;3)Western Blot结果表明,JAK激酶抑制剂AG490处理后的过表达模型细胞的JAK2/STAT3信号轴相关蛋白表达下调。4.TNNT1相关预后分子的初步探索:TMEM191A、PPP1R14BP2、RTN4R、EFNA3、TUBB4A可能是参与TNNT1基因调控胃癌进展的重要预后分子。结论:1.TNNT1基因在胃癌组织中表达上调,且与胃癌患者的预后密切相关,TNNT1的表达也与Stage分期、T分期、N分期有显著的相关性;2.TNNT1基因在胃癌细胞中表达上调,体外实验表明TNNT1基因可以促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭,体内实验表明TNNT1基因可以促进裸鼠的皮下肿瘤的增殖能力,且TNNT1的表达与KI67的表达呈正相关;3.GSEA富集分析及体外实验表明TNNT1基因通过调控JAK2/STAT3信号轴影响胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭。4.TMEM191A、PPP1R14BP2、RTN4R、EFNA3、TUBB4A可能是参与TNNT1基因调控胃癌进展的重要分子。