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背景和目的:近年来,膀胱癌已成为全球第十大最常见癌症,在泌尿系统肿瘤排名最高,膀胱癌的发病率和死亡率均逐年呈上升趋势。尽管手术、放化疗、免疫治疗等迅速发展,但膀胱癌整体治疗效果改善仍然不明显,特别是肌层浸润型,有患者就诊时就已经发生淋巴和脏器转移,术后复发率及远处转移率高,严重威胁患者的生命健康,因此寻找新的膀胱癌标志物和潜在治疗靶点来改善膀胱癌患者的治疗和预后,具有十分重要的临床意义。多项研究证据表明,环状RNA（circular RNA,circ RNA）是一种新型的、具有闭合环状非编码RNA,具有稳定性高、丰度高、组织特异性、序列保守性强等特点,存在于生物体内,circ RNA的生物学功能主要包括:作为miRNA或RNA结合蛋白的竞争性内源性RNA调节靶基因表达,参与转录调控、蛋白质翻译、信号转导等过程。在人类癌症中发挥着关键和独特的生物学作用,多项研究表明circ RNA与膀胱癌增殖、迁移、侵袭、细胞耐药和免疫逃逸有关,有望成为膀胱癌治疗的新靶点。然而,它们在膀胱癌中的具体作用和潜在机制在很大程度上仍然未知。本课题将探究circFSCN1对膀胱癌生物学行为的影响和分子作用机制。方法:1、根据3对膀胱癌组织和癌旁正常组织进行circ RNA测序的结果,在差异性表达circ RNA谱中选出靶分子circFSCN1（circ Base ID:hsa＿circ＿0079283）,qRT-PCR验证circFSCN1在膀胱癌组织和膀胱癌细胞株中的表达水平;通过琼脂糖凝胶电泳实验、RNase R酶消化实验、Random和Oligo（d T）18实验和放线菌素D（Actinomycin D）实验检测circFSCN1在膀胱癌细胞内的稳定性;通过核质分离实验、荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）实验验证circFSCN1在膀胱癌细胞内的定位情况;探索circFSCN1的表达量与膀胱癌患者的临床病例特征变量包括年龄、性别、体重指数（body mass index,BMI）、肿瘤大小、临床病理T分期、淋巴结转移情况、膀胱癌的组织分级之间的关系;单因素多因素分析与膀胱癌患者预后相关的独立危险因素。2、构建稳定沉默circFSCN1的5637膀胱癌细胞和过表达circFSCN1的T24膀胱癌细胞。通过CCK8实验、平板克隆实验、划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验、细胞免疫荧光实验、蛋白质免疫印迹（Western blot,WB）实验验证circFSCN1对膀胱癌细胞增殖、细胞迁移、细胞侵袭和细胞上皮间质化能力的影响及相关标志蛋白。3、根据生物学信息数据Starbase数据库和Circular RNA Interactome数据库预测circFSCN1靶向的miRNA;qRT-PCR验证miRNA在沉默circFSCN1的5637膀胱癌细胞和过表达circFSCN1的T24膀胱癌细胞的表达水平;通过RNA免疫沉淀（RNA immunoprecipitation,RIP）实验、双荧光素酶报告基因实验、细胞免疫荧光实验、miRNA pull down实验证实circFSCN1与miRNA直接结合关系。4、分别使用miRNA inhibitor和miRNA mimics转染稳定沉默circFSCN1的5637膀胱癌细胞和过表达circFSCN1的T24膀胱癌细胞通过CCK-8、平板克隆、Transwell迁移和侵袭实验、划痕实验、细胞免疫荧光分析等设计回复实验验证上调miR-145-5p可逆转circFSCN1对膀胱癌发生发展的影响。5、根据生物学信息数据miRDB及Starbase数据库预测miRNA-145-5p靶向的m RNA基因集;对稳定过表达circFSCN1的T24细胞和沉默circFSCN1的5637膀胱癌细胞行转录组测序,以鉴定差异表达的基因;筛选最有可能结合的m RNA;Pearson相关性分析评估circFSCN1与m RNA的相关性;通过qRT-PCR实验、Western blot、双荧光素酶报告基因、miRNA pull down实验验证miR-145-5p和m RNA之间的相互作用关系。通过CCK-8、平板克隆、Transwell迁移和侵袭实验、划痕实验、细胞免疫荧光分析、蛋白质免疫印迹实验等设计回复实验验证circFSCN1依赖于miRNA靶基因调控膀胱癌细胞的生物学行为。6、裸鼠成瘤体内实验验证circFSCN1对膀胱癌细胞生物学行为的影响:分别将稳定沉默circFSCN1的5637细胞株和阴性对照组的5637膀胱癌细胞分注射到裸鼠皮下,观察瘤体生长情况;通过qRT-PCR实验、Western blot、免疫组化染色实验检测相关分子。结果:1、circFSCN1在膀胱癌细胞系和组织中的表达升高;circFSCN1是环状结构,稳定性高,主要分布膀胱癌细胞质内;circFSCN1的表达水平与肿瘤大小、病理T分期、肿瘤分级相关;单变量和多变量COX回归分析:circFSCN1高表达、病理T分期和膀胱肿瘤分级是膀胱癌患者肿瘤特异性生存率相关的独立危险因素。2、circFSCN1可促进膀胱癌细胞的增殖,迁移、侵袭和上皮间质转化（epithelial–mesenchymal transition,EMT）。3、circFSCN1和miR-145-5p存在直接的相互作用。4、上调miR-145-5p可逆转circFSCN1对膀胱癌发生发展的影响。5、qRT-PCR、Western blot证实circFSCN1正向调控膀胱癌细胞内MDM2和PLOD1的表达;Pearson相关性分析证实circFSCN1表达水平与MDM2和PLOD1表达水平呈正相关;双荧光素酶报告基因实验、miRNA pull down实验验证miR-145-5p和MDM2之间的相互作用关系;回复实验证实si-MDM2可逆转circFSCN1诱导的膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的增强的现象。6、体内实验证实沉默circFSCN1可抑制膀胱癌细胞的成瘤能力。结论:1.circFSCN1在人体膀胱癌细胞及组织中呈高表达,circFSCN1表达与肿瘤大小、病理T分期、肿瘤分级相关,可成为一个新的潜在的预后和治疗靶标。2.circFSCN1通过竞争性结合miR-145-5p,增强MDM2介导的p53沉默促进膀胱癌进展和上皮间质化。