目的探讨SIRT5对大肠癌细胞糖代谢、增殖的作用并探讨其可能的作用机制及SIRT5、HKⅡ在大肠癌组织及癌旁的表达情况。从而阐明SIRT5与HKⅡ的表达水平在大肠癌临床样本中的相关性,为大肠癌的临床研究提供实验依据。方法1、体外培养大肠癌细胞株HCT116、SW480、SW620、HT29、Lo Vo,采用Western blot检测SIRT5蛋白在这五种细胞中的表达水平,并筛选出SIRT5蛋白表达最高与最低的两种细胞。2、在表达最低的细胞中转染SIRT5质粒使其过表达,在表达最高的细胞中转染SIRT5干扰RNA使其沉默,并分别设置对照,验证过表达和干扰效率。3、葡萄糖氧化酶法检测转染后培养液中葡萄糖的含量。4、比色法检测转染后培养液中乳酸的含量。5、克隆形成实验检测转染后细胞的增殖能力。6、CCK8实验检测转染后细胞的活力。7、RT-PCR法检测转染后HKⅡm RNA表达水平。8、在HCT116细胞中共转染SIRT5干扰RNA和Flag-HKⅡ质粒,重复3-6部分实验。9、免疫组织化学染色检测大肠癌癌组织中SIRT5、HKⅡ的表达情况。结果1、Western blot结果显示,SIRT5在五种大肠癌细胞系中的HCT116细胞表达最高,在HT29细胞中表达最低。2、Western blot结果显示,SIRT5-si RNA#3的干扰效果最好。3、葡萄糖氧化酶法检测培养液中葡萄糖含量的结果显示,与对照组相比,沉默SIRT5后,培养液中葡萄糖的浓度明显升高,过表达SIRT5后,培养液中葡萄糖的浓度明显降低。4、比色法检测培养液中乳酸的浓度结果显示,与对照组相比,沉默SIRT5后,培养液中葡萄糖的浓度明显降低,过表达SIRT5后,培养液中葡萄糖的浓度明显升高。5、细胞活力检测结果显示,沉默SIRT5后,细胞的活性相比于对照组明显减弱,过表达SIRT5后,细胞的活性显著增强。6、克隆形成实验结果显示,沉默SIRT5后,细胞的增殖能力相比于对照组明显减弱,过表达SIRT5后,细胞的增殖能力显著增强。7、RT-PCR实验结果显示,沉默SIRT5后,HKⅡm RNA的表达水平明显下降,过表达SIRT5后,HKⅡm RNA的表达水平明显升高。8、Western blot实验结果显示,沉默SIRT5后,HKⅡ蛋白的表达水平明显下降,过表达SIRT5后,HKⅡ蛋白的表达水平明显升高。9、共转染SIRT5干扰RNA和Flag-HKⅡ质粒后结果显示,SIRT5通过调控HKⅡ促进大肠癌细胞葡萄糖的消耗、乳酸的生成和细胞增殖。10、免疫组化结果显示,SIRT5、HKⅡ在大肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织,SIRT5的表达水平与HKⅡ表达水平成正相关。结论沉默SIRT5可减少大肠癌细胞葡萄糖的消耗和乳酸的生成、抑制细胞的活力和克隆形成能力,并会抑制HKⅡ的m RNA和蛋白表达水平。过表达SIRT5则促进葡萄糖的消耗和乳酸的生成、提高细胞的活力和克隆形成能力、促进HKⅡm RNA和蛋白的表达。与癌旁组织相比,大肠癌组织中SIRT5与HKⅡ的表达水平均显著升高,且SIRT5与HKⅡ在大肠癌组织中的表达水平呈正相关。因此我们的研究证实SIRT5通过调控HKⅡ的表达促进大肠癌细胞的有氧糖酵解和细胞增殖。