【摘 要】
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目的验证TGF-β1诱导鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力及P38、AKT的磷酸化水平升高;明确PTEN通过其蛋白磷酸酶活性调节P38的磷酸化修饰,进而抑制TGF-β1诱导鼻咽癌细胞的转移过程;探索PTEN通过蛋白-蛋白相互作用调节P38;研究PTENC端尾结构可能的抑癌功能。方法（1）通过细胞功能实验和Western Blot检测EMT分子指标变化,明确TGF-β1刺激可诱导鼻咽癌细胞迁移、侵袭及EMT
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目的验证TGF-β1诱导鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力及P38、AKT的磷酸化水平升高;明确PTEN通过其蛋白磷酸酶活性调节P38的磷酸化修饰,进而抑制TGF-β1诱导鼻咽癌细胞的转移过程;探索PTEN通过蛋白-蛋白相互作用调节P38;研究PTENC端尾结构可能的抑癌功能。方法（1）通过细胞功能实验和Western Blot检测EMT分子指标变化,明确TGF-β1刺激可诱导鼻咽癌细胞迁移、侵袭及EMT转化,以及探索其合适的刺激浓度;（2）用Western Blot验证TGF-β1刺激对P38和AKT磷酸化水平的影响;（3）运用Western Blot和qRT-PCR明确PTEN在鼻咽癌细胞中的表达水平;（4）在TGF-β1刺激下,过表达NC、PTEN WT及其各突变体质粒（PTEN C124S、PTEN G129E、PTEN Y138L和PTEN 1-353）,明确PTEN蛋白磷酸酶活性调节P38磷酸化水平及EMT过程;（5）运用免疫荧光实验和免疫共沉淀实验探索PTEN和P38相互结合;（6）瞬转NC、PTEN WT及PTEN 1-353质粒,利用Transwell和CCK-8分别验证PTEN C端尾是否影响鼻咽癌细胞的迁移和增殖能力。结果（1）随着TGF-β1的浓度增加,其诱导的鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力逐渐增强;EMT的关键蛋白表达也发生变化;其中,TGF-β1的浓度大于5ng/ml时,鼻咽癌细胞的转移能力明显增强;（2）在5ng/ml的TGF-β1的刺激下,P38和AKT的磷酸化水平明显增强;（3）鼻咽癌细胞株中PTEN的蛋白和mRNA表达量明显低于上皮永生化细胞NP69;（4）在鼻咽癌细胞中瞬转NC、PTEN野生型和各突变体（PTEN C124S、PTEN G129E、PTEN Y138L 和 PTEN 1-353）后,PTEN WT、PTEN G129E可降低TGF-β1诱导的p-P38的表达,抑制EMT转化;而PTEN C124S、PTEN Y138L对TGF-β1诱导的p-P38磷酸化水平以及EMT无明显影响;（5）免疫荧光实验发现PTEN定位在胞浆和胞核,而P38定位在胞核;免疫共沉淀实验同时检测到了 PTEN和P38蛋白条带;（6）与NC组相比较,缺乏C端尾结构的PTEN 1-353突变体和具有C端尾结构的PTEN WT都可抑制TGF-β1诱导鼻咽癌细胞的EMT转化、迁移和增殖能力;但与PTEN WT相比,PTEN 1-353突变体对于鼻咽癌细胞转移能力的影响没有差异,对于鼻咽癌细胞增殖能力的抑制作用减弱。结论（1）TGF-β1可以诱导鼻咽癌细胞的迁移、侵袭和EMT转化;（2）TGF-β1可能诱导了 P38及AKT的磷酸化水平增加;（3）PTEN的表达在鼻咽癌细胞中显著下调;（4）瞬转PTEN及不同突变体质粒后,发现蛋白磷酸酶可能通过抑制P38的磷酸化而影响TGF-β1诱导的鼻咽癌细胞转移;（5）PTEN和P38可能存在蛋白-蛋白相互作用;（6）PTEN蛋白C端尾结构可能参与调控鼻咽癌细胞的增殖,但其对鼻咽癌的转移可能没有影响。
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