【摘 要】
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研究目的:微泡(MIV)是由细胞分泌的大小不一、由脂质双分子层包裹的囊泡状物,它的直径大小在100-1000nm之间。大部分细胞都可以分泌微泡,例如骨髓间充质干细胞、肿瘤细胞、脂肪干细胞和内皮细胞等等。微泡可以存在于多种体液中,例如尿液、乳汁、血液和脑脊液中等。细胞可以将一些重要的生物活性物质分泌到微泡内,通过微泡运输到靶细胞而起到传递信息的作用,这些生物活性物质包括蛋白质、m RNA和micro
【基金项目】
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国家自然科学基金(No.81200091);
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研究目的:微泡(MIV)是由细胞分泌的大小不一、由脂质双分子层包裹的囊泡状物,它的直径大小在100-1000nm之间。大部分细胞都可以分泌微泡,例如骨髓间充质干细胞、肿瘤细胞、脂肪干细胞和内皮细胞等等。微泡可以存在于多种体液中,例如尿液、乳汁、血液和脑脊液中等。细胞可以将一些重要的生物活性物质分泌到微泡内,通过微泡运输到靶细胞而起到传递信息的作用,这些生物活性物质包括蛋白质、m RNA和micro RNA。有研究表明脂肪干细胞可以通过分泌血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素(ANG)等可溶性因子促进血管的新生,另外,脂肪干细胞还可以分泌一种重要的介质—微泡,微泡含有大量的生物活性物质,这些生物活性物质可以介导微泡发挥调节细胞周期、细胞凋亡、细胞黏附以及血管新生的作用。因此我们推测脂肪干细胞来源的微泡也具有促进血管新生的作用。microRNA是一类通过转录后调控机制调节基因表达的非编码小RNA,它的长度在20-25个核苷酸之间。micro RNA具有强大的潜在生物功能,已有研究表明它们在细胞周期、细胞凋亡、分化、黏附和血管新生等方面均有参与。微泡内含有丰富的micro RNA,也有大量研究证实了micro RNA在促进血管新生方面的作用。依据以上研究,不难发现脂肪干细胞来源的微泡在促进血管新生的作用方面存在很大可能的性。所以在本研究中,我们的研究目的是脂肪干细胞来源的微泡在促血管新生方面的作用,并进一步探讨其机制。研究方法:将收集的微泡通过电子显微镜、纳米粒度分析和免疫蛋白印迹方法进行检测。再将收集的脂肪干细胞和脂肪干细胞来源微泡用Trizol处理后送至上海烈冰信息科技有限公司进行micro RNA芯片分析、基因功能分析和micro RNA与靶基因的网络构建。通过上述方法筛选出差异性表达的micro RNA后,选取其中差异性表达的let-7进行荧光定量PCR验证,进而验证芯片分析等结果是否具有可靠性。最后,通过脂肪干细胞来源的微泡对内皮细胞的迁移和侵袭实验,研究其对内皮细胞的作用,再行PKH26染色探讨脂肪干细胞来源微泡是可进入并作用于内皮细胞。研究结果:(1)经过超高速收集到的提取物经鉴定确实为目的产物—微泡;(2)micro RNA芯片分析结果显示脂肪干细胞和脂肪干细胞来源微泡确实存在差异表达micro RNA,表明微泡内的生物活性物质是细胞选择性分泌的;(3)结合芯片分析、差异性表达、micro RNA与靶基因网络构建图和信号通路分析的结果,挑选其中与血管新生作用有关的micro RNA进行鉴定发现,鉴定结果与芯片分析等结果相符,证明芯片分析等结果的可靠性;(4)内皮细胞迁移和侵袭实验证明脂肪干细胞来源微泡确实具有促血管新生作用,且微泡是进入到内皮细胞胞质内发挥作用。结论:脂肪干细胞可分泌微泡,并且其中含有许多差异表达的micro RNA,这些micro RNA是脂肪干细胞选择性分泌出的。脂肪干细胞来源微泡能够促进血管新生,其具体机制可能与它所含let-7的作用相关,这为以后进一步研究促血管新生机制奠定了基础。
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