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在养猪生产中,因养殖环境如大肠杆菌感染和饲料中霉菌毒素超标等导致的仔猪肠道健康问题关乎动物健康和养殖经济效益。如何从饲料营养调控的角度缓解断奶仔猪肠道炎症损伤问题备受关注。植物提取物具有抗炎的功效,但植物提取物成分复杂,作用机制尚不清楚。前期研究已经发现茶树油(主要功能物质为4-萜品醇)具有调节仔猪肠道功能的作用,但尚不明确4-萜品醇在断奶仔猪饲料中运用的实际情况以及其具体的作用机制。并且目前尚未见有关于4-萜品醇对断奶仔猪肠道炎症损伤的影响的报道。因此,本试验选取茶树油中的主要功能物质4-萜品醇,以断奶仔猪为动物模型,以肠道上皮细胞IPI-21细胞为体外模型,研究4-萜品醇对断奶仔猪肠道炎症损伤的调节作用,为断奶仔猪实际生产中4-萜品醇的应用提供科学依据。1.茶树油提取物4-萜品醇对断奶仔猪生长性能和炎症因子分泌的调节作用本试验旨在研究日粮中添加茶树油提取物4-萜品醇对免疫应激断奶仔猪生长性能和炎症因子分泌的调节作用。试验选取28日龄临床健康杂交仔猪40头(杜洛克×(长白猪×大白猪)),21日龄断奶。预饲3d后随机分为5个处理组:(1)正常对照组(对照组,腹腔注射0.9%无菌生理盐水);(2)LPS组(LPS刺激对照组,仔猪腹腔注射100μg/kg LPS);(3)LPS+LTR组(PLT,TER调控组,以基础饮食补充30 mg/kg TER的仔猪并腹膜内注射100μg/kg LPS);(4)LPS+MTR组(PMT,TER调控组,以基础饮食补充60 mg/kg TER的仔猪并腹膜内注射100μg/kg LPS);(5)LPS+HTR组(PHT,TER调控组,以基础饮食补充90 mg/kg TER的仔猪并腹膜内注射100 μg/kg LPS)。测定生长性能、血清炎症因子和LDH含量。结果表明:(1)饲粮中添加中、高剂量的4-萜品醇显著提高断奶仔猪21d的平均日增重(P<0.05)。PMT组和PHT组的平均日采食量显著高于对照组和LPS组(P<0.05)。PLT组料重比显著低于对照组(P<0.05)。饲粮中添加4-萜品醇均能够降低断奶仔猪腹泻率。(2)相比于对照组,LPS组血清中IL-1β、IL-18和TNF-α的含量显著增高(P<0.05),TER各组血清中IL-1β含量显著降低(P<0.05)。TER各组血清中IL-1β和TNF-α含量显著低于LPS组(P<0.05)。PHT组血清中IL-18含量显著低于LPS组(P<0.05)。(3)LPS组血清中LDH的活性显著高于对照组和TER各组(P<0.05)。综上所得,4-萜品醇可以有效提高断奶仔猪生长性能,降低LPS诱导的血清中乳酸脱氢酶的活性和IL-1β、IL-18和TNF-α的含量,降低断奶仔猪炎症反应。2.茶树油提取物4-萜品醇对免疫应激断奶仔猪肠道炎症损伤的调节作用本试验旨在研究茶树油提取物4-萜品醇对免疫应激断奶仔猪肠道炎症损伤的调节作用。试验设计同试验一。测定断奶仔猪小肠长度、肠道绒毛形态、NLRP3炎症小体相关基因表达及蛋白表达、炎症因子相关基因表达及含量测定、细胞程序性死亡相关基因表达及蛋白表达。结果表明:(1)相比于对照组,LPS组断奶仔猪小肠长度显著降低(P<0.05),而4-萜品醇可以缓解这种降低(P<0.05)。4-萜品醇组小肠绒毛发育状况和完整性均优于LPS组和对照组,其中LPS组绒毛发育状况最差,破损较多,且微绒毛也相对发育较差。(2)LPS能够提高断奶仔猪十二指肠、空肠回肠中IL-1β、IL-18和TNF-α mRNA相对表达量和含量,而4-萜品醇可以有效缓解这种提高。PMT组三个肠道中TNF-αmRNA相对表达量均低于LPS组。PMT组三个肠道中IL-1β的含量均显著低于LPS组(P<0.05),TER各组空肠和回肠中TNF-α的含量均显著低于LPS组(P<0.05)。(3)LPS组断奶仔猪三个肠道中Caspase-9和GSDMD mRNA相对表达量均显著高于对照组(P<0.05)。相比于LPS组,PLT组断奶仔猪三个肠道中Caspase-3 mRNA相对表达量降低,PLT和PMT组三个肠道中Caspase-9 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。TER各组三个肠道中GSDMD mRNA相对表达量均显著低于LPS组(P<0.05)。同样的,LPS组断奶仔猪空回肠中Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的蛋白相对表达量显著高于对照组(P<0.05),而4-萜品醇可以有效缓解LPS诱导的上升。(4)LPS组能够显著提高断奶仔猪肠道中NLRP3、ASC和Caspase-1 mRNA相对表达量(P<0.05),而饲料中添加4-萜品醇能够有效缓解这种提高。PMT组NLRP3、ASC和Caspase-1 mRNA相对表达量显著低于LPS组(P<0.05)。同时LPS能够显著提高空肠中NLRP3和Caspase-1的蛋白相对表达量(P<0.05),并能够提高回肠中NLRP3、ASC和Caspase-1的蛋白相对表达量,而4-萜品醇能够降低这种提高。综上所得4-萜品醇可以有效缓解LPS诱导的肠道形态损伤,促进肠道绒毛发育完善,抑制LPS诱导的肠道细胞凋亡和焦亡及NLRP3相关蛋白表达,进而缓解断奶仔猪肠道炎症。3.茶树油提取物4-萜品醇对免疫应激猪肠上皮细胞炎症损伤的调节作用本试验旨在研究茶树油提取物4-萜品醇对免疫应激猪肠上皮细胞炎症损伤的调节作用。试验选取猪肠上皮细胞IPI-2I,试验分为4个组:空白对照组(CON组,基础培养基培养)、LPS处理组(LPS组,10μg/mLLPS刺激)、LPS+4-萜品醇处理组(P+T组,TER调控组,细胞培养液中添加10μg/mLLPS和0.01%4-萜品醇)、4-萜品醇处理组(TER组,细胞培养液中添加0.01%4-萜品醇)。测定细胞活力、细胞凋亡率、LDH含量、NLRP3炎症小体相关基因表达及蛋白表达、炎症因子相关基因表达及含量测定、细胞程序性死亡相关基因表达及蛋白相对表达。结果表明:(1)细胞中添加0.01%4-萜品醇时,IPI-2I细胞活力显著高于对照组(P<0.05),而随着4-萜品醇浓度不断增加时,IPI-2I细胞活力逐渐下降。(2)LPS组中IPI-2I细胞活力显著低于对照组和TER组(P<0.05),而P+T组相比于LPS组没有显著差异,但有上升的趋势。(3)LPS组IPI-21细胞上清中LDH含量显著高于对照组和TER组(P<0.05)。P+T组细胞上清中LDH含量低于LPS组。(4)相比于对照组和TER组,LPS组IPI-2I细胞中IL-1β、IL-18和TNF-α的mRNA相对表达量和IL-1β、TNF-α的含量显著提高(P<0.05)。而P+T组细胞中IL-1β、IL-18和TNF-α的mRNA相对表达量显著低于LPS组(P<0.05),并且使细胞中IL-1β、IL-18和TNF-α的含量下降。(5)相比于对照组和TER组,LPS组IPI-2I细胞凋亡率显著提高(P<0.05),4-萜品醇可以显著降低这种升高(P<0.05)。(6)相比于对照组,LPS组IPI-2I细胞上清中Caspase-8、Caspase-9和GSDMD mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。4-萜品醇可以显著降低细胞中GSDMD mRNA相对表达量、Caspase-8 和 Caspase-9 的蛋白相对表达量(P<0.05),缓解 Caspase-3 的表达。(7)LPS能够显著提高IPI-2I细胞中NLRP3和Caspase-1 mRNA相对表达量,ASC和Caspase-1的蛋白相对表达量(P<0.05),而4-萜品醇可以有效降低NLRP3、ASC和Caspase-1的mRNA相对表达量和蛋白相对表达量。综上所得,4-萜品醇可以有效促进细胞活力,降低LDH含量,抑制细胞凋亡和焦亡,抑制NLRP3相关蛋白的表达,降低炎症反应。综上所述,断奶仔猪日粮添加茶树油活性成分4-萜品醇能够有效提高断奶仔猪生长性能,有效抑制LPS诱导的血清中LDH的含量和细胞因子的含量,有效改善肠道炎症损伤导致的肠道绒毛和微绒毛受损状态,减少肠道中炎症因子的表达和抑制细胞程序性死亡,抑制肠道中NLRP3炎症小体的激活,缓解断奶仔猪炎症损伤。同时茶树油活性成分4-萜品醇能够抑制肠上皮细胞产生LDH,抑制细胞内NLRP3炎症小体的激活,抑制细胞炎症因子的表达和细胞程序性死亡,保护肠上皮细胞免受炎症损伤。