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目的:瘙痒是一种不愉快的生理反应,通常会导致抓挠。良性的瘙痒有助于保护自身不受伤害,然而在临床上,许多皮肤病和全身性疾病可产生持续时间超过六周的病理性慢性瘙痒,对患者造成极大痛苦。诱发瘙痒的机制复杂多样,而5-HT作为体内重要的神经递质和瘙痒介质,通过下游不同的5-HT受体参与瘙痒的调控。目前临床上5-HT4受体的激动剂西沙必利,莫沙必利等药物都有瘙痒的副作用,但5-HT4受体是否真的参与瘙痒的发生,以及机制是怎样的我们尚未可知,因此本文旨在阐明5-HT4受体与痒之间的关系是怎样的。我们通过一系列动物行为实验,分子实验等手段,探究5-HT4受体参与介导急慢性瘙痒的分子机制,寻找新的痒觉靶点,探索新的瘙痒机制,为临床上治疗瘙痒提供新的思路和策略。方法:1.通过在小鼠颈部和小鼠脸颊皮内注射不同剂量的5-HT4受体激动剂BIMU8和5-MeOT,检测5-HT4受体激动剂是否可以诱发小鼠瘙痒,随后给小鼠腹腔注射5-HT4受体拮抗剂GR125487半小时后颈部皮内注射5-HT4受体激动剂BIMU8或5-MeOT,通过行为学实验检测激活5-HT4受体是否可以诱发瘙痒。2.通过给小鼠注射不同剂量的5-HT和5-HT4受体拮抗剂GR125487,来探究5-HT4受体参与高剂量还是低剂量5-HT诱发的瘙痒。3.通过分别给小鼠注射扑尔敏（Chloropheniramine）、Compound48/80、氯喹（CQ）、超强辣椒素（RTX）等药物,探究组胺受体、肥大细胞、C纤维是否参与了激活5-HT4受体诱发的瘙痒。4.通过给小鼠注射TRP通道泛阻断剂钌红Ruthenium red（RR）、TRPA1拮抗剂 HC030031、TRPV1 拮抗剂 Capsazepine 和 TRPV4 拮抗剂 HC067047,探究TRP通道与激活5-HT4受体诱发瘙痒的关系。随后通过给TRPV1-/-、TRPA1-/-以及TRP V4-/-小鼠注射5-HT4受体激动剂BIMU8,对TRP通道与5-HT4诱发瘙痒的关系进行验证。5.在小鼠颈部皮内注射5-HT4受体激动剂BIMU8后,分别隔10 min和30 min剥离小鼠背根神经节（DRG）,通过Western blotting的方法检测ERK磷酸化的情况。随后给小鼠鞘内注射MEK抑制剂U0126,半小时后皮内注射BIMU8,通过观察小鼠的抓挠行为,探究ERK的磷酸化是否参与激活5-HT4受体诱发的瘙痒。6.建立银屑病（IMQ）,干皮病（AEW）和特应性皮炎（AD）三种小鼠模型,造模成功后剥离小鼠的DRG,通过Q-PCR的方法检测在这三种模型中5-HT4受体mRNA的表达情况。7.在建立AD模型过程中,每天在小鼠腹腔注射5-HT4受体拮抗剂GR1254875 mg/kg,对照组注射生理盐水,通过动物行为学测试,观察药物处理对于小鼠的瘙痒产生的影响;通过HE染色,探究药物对于小鼠皮肤厚度的影响;剥离造模小鼠DRG,通过Q-PCR的方法检测不同组别中的5-HT4受体、TRPA1、TRPV1、Nav1.7和Nav1.8 mRNA表达情况。随后通过Western blotting的方法检测不同组别中5-HT4受体、TRPA1和TRPV1蛋白的表达情况。8.通过免疫荧光实验,检测在AD模型中5-HT4与NeuN和5-HT4与p-ERK的共标情况。结果:1.在小鼠颈部和脸颊皮内注射5-HT4受体激动剂BIMU8和5-MeOT后,诱发小鼠产生剂量依赖式的抓挠反应而非对脸颊的擦拭反应,5-HT4受体激动剂诱发的抓挠反应能够被5-HT4受体拮抗剂所抑制,这显示了激活5-HT4受体能够诱发瘙痒。2.5-HT4受体拮抗剂GR125487能够抑制低剂量5-HT诱发的抓挠行为,显示了 5-HT4受体可能参与低剂量5-HT诱发的瘙痒。3.一系列药理学实验结果显示组胺受体和肥大细胞不参与激活5-HT4受体诱发的瘙痒,而C纤维参与这个过程。4.TRP 通道泛阻断剂 Ruthenium red（RR）、TRPA1 拮抗剂 HC030031、TRPV1拮抗剂Capsazepine以及TRPA1或TRPV1的基因敲除都可以抑制BIMU8诱发的瘙痒,而TRPV4拮抗剂HC067047或是TRPV4的基因敲除不能抑制BIMU8诱发的瘙痒。5.Western blotting结果显示5-HT4受体激动剂BIMU8能够明显上调小鼠DRG中p-ERK的表达,MEK抑制剂U0126能够抑制BIMU8诱发的瘙痒。6.Q-PCR结果显示在IMQ、AEW和AD三种慢性痒模型中,只有在AD小鼠的DRG中5-HT4受体的表达明显升高。7.药理学实验数据显示5-HT4受体拮抗剂GR125487能够抑制AD诱发的瘙痒。HE染色结果显示GR125487能够减轻AD小鼠皮肤的增厚。Q-PCR结果显示GR125487能够下调 AD 小鼠的 DRG 中 5-HT4 受体、TRPA1、TRPV1、Nav1.7和Nav1.8 mRNA的表达。Western blotting结果显示GR125487能够下调AD小鼠的DRG中5-HT4受体、TRPA1和TRPV1蛋白的表达。8.免疫荧光实验结果显示在AD小鼠的DRG中5-HT4与NeuN和p-ERK存在大量共标,而5-HT4受体拮抗剂GR125487能够减少它们的共标。结论:1.激活5-HT4受体能够诱发急性痒和慢性痒2.5-HT4受体通过激活TRPA1和TRPV1通道,引起胞内ERK磷酸化成p-ERK来传递瘙痒信号。