骨肉瘤是一种最常见的原发性骨肿瘤，常发于青少年人群中。据统计，骨肉瘤占青少年癌症的5%，在青少年肿瘤相关的死亡中占8.9%。其总体发病率是每年每百万人有5例。尽管近年来包括化疗和手术治疗在内的现代多学科治疗方法都在不断的发展，骨肉瘤患者的5年生存率仍然只是维持在60-70%。因此，迫切需要开发新方法来治疗骨肉瘤患者。最近在肿瘤相关信号通路和新型基因靶向治疗的研究进展，为预防和治疗骨肉瘤提供了新的策略和途径。目前与骨肉瘤发生发展相关的关键基因包括FAS、Ezrin、CXCR4、COX-2、HER2、以及NOTCH和HES1等。尽管已经有这些研究进展，但是仍缺乏一个能准确预测骨肉瘤进展、转移和对化疗反应性的标志性分子。NOB1蛋白是26S蛋白酶体的一个亚单位，在蛋白酶功能和RNA代谢过程中发挥重要作用。最近的研究发现NOB1在多种肿瘤中异常表达且发挥重要功能。在乳头状甲状腺癌的研究中，相比正常甲状腺组织和良性甲状腺肿瘤组织，NOB1显著高表达于恶性甲状腺癌组织。在卵巢癌的研究中，敲除NOB1可以显著减弱卵巢癌细胞的增殖能力和克隆形成能力，并使肿瘤细胞阻滞在G0/G1期。NOB1敲除还可以显著降低乳腺癌细胞的增殖能力。此外，在非小细胞肺癌的研究中，NOB1敲除可同时减弱体外实验中肿瘤细胞的增殖以及体内实验中肿瘤的生长。但是，到目前为止还未有任何研究报道NOB1在骨肉瘤中的功能。在本研究中，我们通过shRNA敲除骨肉瘤细胞中NOB1的表达，研究NOB1在骨肉瘤细胞生长和迁移中的作用，进一步利用mRNA表达谱芯片对所构建的对照组Lv-shCon-U2OS细胞和NOB1稳定干扰组Lv-shNOB1-U2OS细胞分别做表达谱分析。首先我们采用Western blot检测多种骨肉瘤细胞系中NOB1的表达水平。然后利用慢病毒介导的shRNA干扰NOB1的表达并通过MTT实验、克隆形成实验和细胞周期实验研究NOB1在骨肉瘤细胞生长中的作用。通过Transwell实验检测细胞的运动能力。此外，还利用定量PCR技术检测了E-cadherin和β-cateninmRNA的表达变化。最后通过对所构建的对照组Lv-shCon-U2OS细胞和NOB1稳定干扰组Lv-shNOB1-U2OS细胞作全基因组表达谱基因芯片检测，并筛选分析差异表达分子的功能。细胞功能实验检测结果显示，NOB1干扰后，骨肉瘤细胞的细胞生长能力被显著抑制，进一步通过流式细胞术检测发现，NOB1干扰后细胞周期被阻滞在G2/M期。同时，NOB1敲除后，骨肉瘤细胞的运动能力显著被抑制，且伴随上皮标志分子E-cadherin和β-catenin的表达上调。mRNA表达谱芯片数据显示，NOB1干扰后共有792个基因mRNA表达上调，以及1059个基因mRNA表达下调。这些差异分子所编码的蛋白涉及领域包括细胞质膜成分、钙离子结合活性以及信号转导过程。通过以上研究我们证明了NOB1在骨肉瘤的发展过程中发挥重要作用，NOB1可能是治疗骨肉瘤的潜在有效治疗靶点。