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人类生殖细胞遗传物质突变所引起的疾病称为遗传性疾病,简称遗传病。人类的遗传物质在细胞水平是染色体,在分子水平是DNA,所以因染色体畸变或DNA突变而引起的疾病是遗传病。遗传性疾病可以分为染色体病、单基因遗传病、多基因遗传病和线粒体基因遗传病。2003年,人类基因组计划的完成使遗传学进入了基因组学时代,这也为遗传性疾病的研究开辟了新纪元,目前有多种与遗传有关的疾病危害人类的健康,影响人类的生活质量。本论文主要研究内容包括:睑裂狭小-上睑下垂-倒转型内眦赘皮综合征患者的FOXL2基因突变研究;遗传性皮肤病特应性皮炎相关易感基因FLG基因突变的研究;与营养不良型大疱性皮炎患者的COLTA1基因突变的筛查;进行性对称性红斑角化症患者中兜甲蛋白基因突变的检测等。为从分子遗传学水平探索这几种疾病的发病机制,为疾病的产前诊断、早期预防、早期诊断及遗传咨询提供依据。1.中国睑裂狭小-上睑下垂-倒转型内眦赘皮综合征(Blepharophimosis,Ptosis,Epicanthus Inversus syndrome,BPES)患者的FOXL2基因突变研究研究背景:典型的睑裂狭小综合征是一种复合的眼睑畸形,主要有四种畸形特征:睑裂狭小、上睑下垂、倒转型内眦赘皮及内眦距离过宽。BPES分为两种类型:BPESⅠ型包括四种眼部畸形特征及由于卵巢功能早衰(premature ovarian failure,POF)导致的女性不孕症;BPESⅡ型仅包括四种眼睑畸形特征。目前已知与BPES有关的基因只有FOXL2。目的:检测中国BPES患者的FOXL2基因突变。方法:提取患者外周血全基因组DNA,设计引物,进行PCR反应扩增目的片段,采用ABI3130进行全自动测序。结果:在家系A中发现了17bp(1081-1097del)的缺失突变,家系B和家系C中均检测到插入突变,插入的具体序列尚待确定。结论:1081-1097del缺失突变尚未见报道,本研究结果扩大了FOXL2基因的突变谱。2.1 FLG基因多态性与特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)的相关性研究研究背景:中间丝相关蛋白是皮肤屏障功能的一个重要蛋白。最近研究表明位于编码中间丝相关蛋白(filaggrin,FLG)基因上的突变是鱼鳞癣(ichthyosis vulgaris,Ⅳ)的一个致病因素,也是特应性皮炎的一个重要的易感因素。目的:研究中国AD患者中FLG基因多态性分布及其与发病的相关性。方法:采用限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)筛查已报道的突变,DNA直接测序的方法发现未知新突变。本研究一共检测了22例患者和144名健康对照。结果:在中国AD患者FLG的突变位点和频率具有特殊性,不同于欧洲人群的突变。本研究共检测了22例患者和144名健康对照,均未检测到在欧洲人群中报道的突变R501X和2282del4;日本人群中报道了突变S2554X和3321delA,在本研究中的22名患者和144名健康对照中未检测到S2554X,22名患者中检测到3例3321delA(13.6%),而144名健康对照中检测到9例(6.3%)。另外本研究发现了3个新的SNP位点,分别为E755K,K2444E和L2481S。结论:本研究结果表明中国AD患者FLG基因的突变不同于欧洲人群,和日本人群也不完全相同。2.2营养不良型大疱性表皮松解症(Dystrophic epidermolysis bullosa,DEB)患者COL7A1基因突变筛查研究背景:目前已知与DEB相关的基因只有COLTA1。据文献报道,亚洲地区DEB病例的COL7A1基因突变位点主要集中在第73-75外显子区域,我们推测亚洲地区此病的COL7A1基因突变热点很可能位于73-75外显子之间。目的:检测2例RDEB患者的COL7A1基因突变位点方法:对2例患者COL7A1基因的第73-75外显子设计引物,进行目的片段PCR扩增,采用ABI3130进行全自动测序反应。结果:在2例RDEB患者COL7A1基因的第73-75外显子区域未检测到突变。结论:这2例RDEB患者具有家系特异性,需要进一步对COL7A1基因进行全基因测序以检测其突变位点。2.3进行性对称性红斑角化症(Progressive Symmetric Erythrokeratoderma,PSEK)患者的兜甲蛋白基因(Loricrin gene,LOR)突变的检测目的:研究在PSEK患者兜甲蛋白基因突变。方法:提取患者外周血全基因组DNA,针对LOR编码测序设计2对引物,进行目的片段PCR扩增,采用ABl3130进行全编码序列测定。结果:通过编码序列测序在兜甲蛋白基因上没有发现可致病的突变。结论:本研究为PSEK遗传异质性提供了证据,根据研究表明兜甲蛋白不是该例PSEK的致病因素。此种疾病除了LOR基因很可能受其他基因的影响。收集和研究更多的中国人PSEK家系,有利于对研究结果进一步补充和深入。