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目的:采用体内外实验相结合的方法研究五子衍宗方（Wuziyanzong Recipe,WZ）通过Nrf2信号通路抑制睾丸精原细胞凋亡的作用及其机制。方法:动物实验:分别取3月龄、6月龄、12月龄、18月龄和22月龄SPF级SD雄性大鼠各10只,称取大鼠质量后,乌拉坦麻醉处死,快速取出大鼠睾丸组织和附睾组织。检测如下指标:（1）称取睾丸和附睾重量,计算睾丸和附睾指数;（2）HE染色观察睾丸组织形态变化;（3）TUNEL检测睾丸精原细胞凋亡情况;（4）免疫荧光检测Nrf2和内质网未折叠蛋白反应(UPRER)相关蛋白GRP78、p-PERK、p-eif2α、ATF4、p-IRE1、ATF6和XBP1的表达和定位。随后取30只16月龄SPF级雄性SD大鼠,按随机分组原则分为衰老模型组,WZ低剂量（WZ 1 g/kg）组和WZ高剂量（WZ 4 g/kg）组,每组10只。另购买2月龄SPF级SD雄性大鼠10只作为青年对照组。WZ（1 g/kg）组和WZ（4 g/kg）组分别给予1 g/kg和4 g/kg含药饲料喂养,同时青年对照组和衰老模型组给予正常饲料喂养。饲养4个月后,称取大鼠质量,乌拉坦麻醉处死,快速取出大鼠睾丸组织和附睾组织。检测如下指标:（5）称取大鼠睾丸质量,计算睾丸指数;（6）检测附睾中精子密度和精子活力;（7）ELISA检测睾丸组织中睾酮和雌二醇水平;（8）HE染色观察睾丸组织形态变化;（9）TUNEL检测睾丸精原细胞凋亡情况;（10）免疫荧光检测睾丸Nrf2和UPRER相关蛋白及内质网应激（ERS）介导的凋亡相关蛋白Caspase12、Caspase9和Caspase3的表达情况。细胞实验:（1）不同浓度（0、50、100、150、200、250、300、350 m M）D-半乳糖（D-gal）处理精原细胞系GC-1细胞24 h、36 h、48 h、60 h、72 h后,MTT检测细胞活力,筛选D-gal处理浓度和时间;（2）不同浓度D-gal刺激GC-1细胞48 h后,用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,确定D-gal诱导GC-1细胞凋亡的浓度;（3）Western blot检测250 m M D-gal处理GC-1细胞不同时间Nrf2和UPRER相关蛋白的变化水平;（4）不同浓度WZ处理细胞,MTT检测细胞活力,筛选WZ用药浓度;（5）Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测WZ处理细胞后细胞凋亡率的变化情况,筛选WZ缓解D-gal诱导的GC-1细胞凋亡浓度;（6）运用DCFH-DA荧光探针检测GC-1细胞ROS水平;（7）采用Fluo-4 AM荧光探针检测GC-1细胞内钙离子水平;（8）免疫荧光检测Nrf2信号通路Nrf2、NQO1和HO-1蛋白表达情况;（9）Western blot检测Nrf2和UPRER相关蛋白及ERS相关凋亡蛋白的表达水平。结果:动物实验:（1）与6月龄相比,22月龄大鼠睾丸重和附睾重显著下降;12月龄、18月龄和22月龄大鼠睾丸指数、附睾指数显著下降;（2）HE染色结果显示,3月龄、6月龄和12月龄大鼠睾丸曲细精管结构完整,各级生精细胞排列规则紧密,而18月龄和22月龄大鼠睾丸生精小管萎缩,生精小管之间的间隙变大,生精细胞有明显脱落现象;（3）TUNEL结果显示,3月龄、6月龄和12月龄睾丸凋亡精原细胞数较少,而18月龄和22月龄凋亡精原细胞数明显增多;（4）免疫荧光结果显示,与3月龄相比,6月龄大鼠精原细胞上Nrf2和UPRER相关蛋白表达增加,而与6月龄相比,18月龄和22月龄的精原细胞上Nrf2和UPRER相关蛋白表达减少;（5）WZ（1 g/kg）组和WZ（4 g/kg）组均能明显的上调睾丸重量及其指数、附睾中精子密度和精子活力、睾酮水平和下调雌二醇水平;（6）HE染色结果显示,WZ（1 g/kg）组和WZ（4 g/kg）组均能有效改善衰老睾丸组织形态;（7）TUNEL结果显示,WZ（1 g/kg）和WZ（4 g/kg）能不同程度的减少睾丸精原细胞凋亡;（8）免疫荧光结果显示,WZ能明显上调精原细胞上Nrf2和UPRER相关蛋白的表达,下调精原细胞上ERS介导的凋亡相关蛋白的表达。细胞实验:（1）MTT和Annexin V-FITC/PI双染流式结果表明,250 m M D-gal处理细胞48 h,细胞早期凋亡率达到20%以上,可以明显诱导细胞凋亡;（2）Western blot结果显示,250 m M D-gal处理GC-1细胞48 h时,Nrf2和UPRER相关蛋白的表达水平低于0 h的表达量;因此,我们选取250 m M D-gal处理细胞48 h进行以下研究;（3）MTT结果显示,WZ浓度在0.8 mg/ml以下时对250 m M D-gal处理的细胞活力有明显保护作用;（4）Annexin V-FITC/PI双染结果显示,WZ浓度为0.1、0.2和0.4 mg/ml时,对D-gal诱导的细胞凋亡有保护作用;（5）DCFH-DA荧光探针结果显示,WZ（0.1、0.2和0.4 mg/ml）能明显的降低D-gal（250 m M）组细胞ROS水平;（6）Fluo-4 AM荧光探针结果显示,WZ（0.1、0.2和0.4 mg/ml）能明显的下调D-gal组细胞钙离子水平;（7）免疫荧光结果显示,WZ（0.1、0.2和0.4 mg/ml）能明显的升高D-gal组Nrf2、HO-1和NQO1的表达;（8）Western blot结果显示,D-gal组Nrf2和UPRER相关蛋白的表达显著下降,ERS相关凋亡蛋白显著上升;与D-gal组相比,WZ能显著的上调Nrf2和UPRER相关蛋白的表达,下调ERS凋亡相关蛋白的表达。结论:WZ能显著抑制睾丸精原细胞凋亡,其机制与激活Nrf2信号通路,增强UPRER能力有关。