沙田柚(Citrus grandis L. cv.Shatianyou)为芸香科柑桔属植物，其果肉酸甜适度、营养丰富。然而，由于其果实中籽较多，影响了人们的鲜食和加工。因此，沙田柚无核品种的培育具有十分重要的经济价值，是我国目前柑桔品种改良的重要目标之一。　　 本研究以沙田柚为材料，首次克隆沙田柚肌动蛋白基因(actin)全长，进行了生物信息学的分析。并使用荧光原位杂交技术，对沙田柚肌动蛋白基因(actin)在其染色体上进行了定位，可为沙田柚的细胞遗传学提供基础资料。此外，由于actin为植物发育的关键基因，利用反义RNA技术，将本实验室已获得并鉴定的柑桔球蛋白基因启动子(citrin promoter，Pcitrin)与沙田柚actin保守片段反向重组，构建反义表达载体，并转化根癌农杆菌，为进一步的遗传转化打下了良好的基础。主要研究结果如下：　　 1.通过对NCBI上已公布的拟南芥、豌豆和蓝猪耳等植物的actin基因序列进行比对，在其保守区域设计一对特异引物，采用PCR技术从柑桔属沙田柚(C. grandis L. cv.Shatianyou)、贡柑(C. reticulata Blanco cv. Gonggan)和丰彩暗柳橙(C. sinensis Osbeck cv.Fengcaianliucheng)基因组DNA中分别获得长度为2191bp、2193 bp和2199 bp的扩增片段。对三种植物的actin基因进行生物信息学分析，证实所获得的扩增片段均包含三种植物actin基因的全长。　　 2.利用生物信息学的方法对沙田柚actin基因进行了二级结构和三级结构的预测。基于推导的氨基酸序列构建了系统进化树，结果显示，同属于芸香科的沙田柚、贡柑和丰彩暗柳橙聚为一类，从其进化位置上看，沙田柚和丰彩暗柳橙具有更近的亲缘关系。　　 3.采用切口平移法标记沙田柚actin基因，采用荧光原位杂交技术(FISH)对actin基因在沙田柚染色体上的定位进行了研究。结果表明，actin基因位于沙田柚第4号染色体的长臂。　　 4.将沙田柚actin基因保守区内部扩增获得459 bp片段作为反义基因片段，与已获得的柑桔球蛋白基因启动子(citrin promoter，Pcitrin)重组，构建了反义表达载体pB1301++actin。分别用感受态法和冻融法将该质粒转入大肠杆菌DH5a和根癌农杆菌LBA4404。序列测定和双酶切检测结果表明，反义表达载体pB1301++actin的构建成功，并将其导入根癌农杆菌LBA4404。