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乙肝病毒表面抗原(Hepatitis B Virus surface antigen,HBsAg)是乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)重要的结构蛋白之一,能诱导机体产生保护性免疫应答,在HBV与宿主相互作用过程中发挥重要作用。此外, HBsAg也是HBV疫苗的重要成分及诊断HBV感染的重要依据,因而具有重要的生物学意义。
S基因变异是HBV研究领域的热点之一,其产生和流行主要受到大规模免疫接种、HBV长期慢性感染以及药物治疗等因素的影响。这些免疫压力的存在导致S抗原MHR区尤其是“a”决定簇出现个别或多个氨基酸突变,使得HBsAg的抗原性和免疫原性发生改变,从而突破机体已经形成的免疫防护体系造成新的HBV感染。另一方面,S基因变异还可导致变异株不能被常规检测试剂测及,造成漏检等问题。
作为决定d/y亚型或w/r亚型的关键位点,HBsAg第122位和第160位氨基酸变异除可导致HBsAg亚型变化,还可引起突变病毒逃避机体的免疫应答。近来,田拥军等人的研究则进一步证实K1221取代严重地影响了HBsAg的抗原性。相比之下,对160位点的了解较少。目前除了知道160位点的变异可导致亚型变化之外,有关其对抗原性和免疫原性的影响尚无人研究。本文以2003年陆蒙吉等人发现的160N取代为基础,研究了160N突变对HBV生物学功能的影响。
第一章的综述部分首先简要介绍了HBV及HBsAg的相关知识;其次详细介绍了S基因变异的研究进展,主要阐述了S基因变异产生的原因、变异的类型,以及变异所产生的主要影响;最后结合对研究进展的分析提出了本论文的研究目的和意义。
第二章构建了含有一系列突变的HBsAg的表达载体,包括A159G、K160N、A159G/K160N等氨基酸取代突变,另外还有两个以前构建的表达载体,分别含有K1221和T123N突变。观察了这些突变对HBsAg在细胞中表达和亚定位分布的影响。结果发现,T123N和K160N取代的HBsAg出现了超糖基化现象,并在细胞内呈核周聚集趋势。
第三章通过ELISA和DNA免疫方法全面分析了突变对于HBsAg抗原性和免疫原性的影响。研究发现各突变均导致HBsAg的抗原反应性有不同程度降低,尤其是A159G/K160N的双突变。随后又用DNA免疫方法对突变HBsAg的免疫原性进行了进一步分析,结果表明,A159G/K160N HBsAg和A159G HBsAg诱导了特异性发生改变的体液免疫应答,而K1221 HBsAg则诱导产生了明显减弱的抗体应答;K160NHBsAg诱导的细胞免疫应答则明显增强。这些结果进一步证实了HBsAg的突变会导致其抗原性和免疫原性发生重要改变。
论文第四章进一步探讨了S基因突变对HBV复制的影响。结果发现,突变前后HBV的复制无明显变化。
本论文对160N等在内的HBsAg突变在HBV生物学功能中的作用进行了探索,研究结果有助于进一步揭示HBsAg突变在HBV免疫逃逸中的作用及相关临床意义。