猪腺病毒3型（porcine adenovirus serotype 3,PADV-3）是临床比较常见的一种病毒,感染猪群常出现轻微腹泻症状,而且经常与其他可以引起猪群腹泻的病毒混合感染。目前关于PADV-3的检测方法主要有普通PCR和荧光定量PCR方法,血清学检测方面的相关研究比较少。六邻体（Hexon）蛋白是PADV-3病毒衣壳的主要蛋白,可以刺激机体产生中和抗体,所以常被作为PADV-3相关检测的主要关注点。目前已有学者将Hexon全长基因在原核表达系统中进行表达,但是表达的蛋白是以包涵体的形式存在,限制了其应用。Hexon基因的抗原决定簇的主要在超变区HVR1-HVR6,可选择该超变区作为检测PADV-3的主要衣壳蛋白。小泛素相关修饰物（small ubiquitin-relatived modifiter,SUMO）具有促进目的蛋白正确折叠,提高蛋白表达量以及屏蔽毒性的优良作用。因此,本试验在PADV-3的Hexon的HVR1-6区添加猪源SUM03标签以提高Hexon-HVR1-6蛋白在大肠杆菌系统中的可溶性表达,并建立基于Hexon高变区蛋白的ELISA的血清学方法。本试验首先扩增了PADV-3的Hexon基因的超变区HVR1～HVR6,并在其N端分别添加酵母来源SUMO基因、猪源SUMO1基因、猪源SUMO3基因,然后插入到pET28a载体中。将重组质粒转化至宿主菌BL21（DE3）进行诱导表达。挑选表达量最高的重组蛋白对其诱导条件进行优化,按照最优条件获得大量融合蛋白,用镍柱对其进行纯化。运用SDS-PAGE分析和免疫印迹方法对获得的融合蛋白进行检测。结果表明猪源SUMO3的促溶效果最好。SUMO3-Hexon-HVR1-6融合蛋白的最佳诱导温度是37℃,IPTG的最佳浓度为0.1 mM,经镍柱纯化之后可以6 mg/L的融合蛋白,经SDS-PAGE分析和Western-blot检测融合蛋白纯化效果较好,免疫原性良好。为了方便有效的检测猪群中猪腺病毒3型（PADV-3）的抗体阳性率,通过将原核表达的重组猪源SUMO3-Hexon-HVR1-6作为包被抗原建立间接ELISA检测方法,并对该方法的敏感性和特异性进行评价。结果显示,SUMO3-Hexon-HVR1-6的间接ELISA检测方法的最佳包被浓度为6 μg/mL;血清样品的最佳稀释度和最佳孵育条件分别为1:80和37℃,1h;酶标二抗IgG-HRP的最佳稀释度和最佳孵育条件分别为原液浓度和37℃,1h;最佳封闭液以及封闭条件为2%的BSA溶液37℃封闭1h;样品阴、阳性的临界值为0.362。利用此种ELISA检测方法对临床常见的几种猪病毒阳性血清进行检测,并无交叉反应;当血清样品稀释到1:320时仍能检测出阳性血清;批内重复的变异系数为1.0%～3.9%之间,批间重复变异系数在0.5%～8.3%之间;本间接ELISA检测方法与PCR核酸检测的阳性符合率为88%。利用建立的间接ELISA检测方法对不同猪场采集的241份血清样品进行检测,检测出阳性血清48份,阳性率为19.9%。本试验建立的间接ELISA检测方法方便、快捷、灵敏、有效,可用于PADV-3的检测以及流行病学的调查。