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目的:本研究拟行膀胱逼尿肌逆行示踪,观察腰骶髓切片,明确骶副交感神经核(SPN)位置,以准确造成骶上脊髓损伤和骶髓损伤实验动物模型,并为下一步实验光感基因的准确导入骶髓内骶副交感神经核(SPN)奠定了基础。同时观察不同节段骶神经后根是否存在阳性纤维,从而定位需要切断的骶神经后根,避免引起骶段其他感觉和反射的丧失。为光感基因转染入骶髓内骶副交感神经核(SPN)并联合骶神经后根切断去传入治疗骶上脊髓损伤打下基础。方法:大鼠膀胱壁内注射WGA-HRP,WGA-HRP注射后大鼠继续存活48小时。随后灌注固定,取材,切片,组织化学反应,显微镜观察。根据逆行示踪的结果,明确了支配膀胱逼尿肌的骶髓低位中枢——骶副交感神经核(SPN)的位置,且进行骨性标志定位,确保了损伤节段的选取无误;同时明确了大鼠膀胱传入神经的主要聚集区。随后即进行骶上脊髓损伤及骶髓损伤,以及骶上脊髓损伤联合切断主要的膀胱传入神经,观察大鼠膀胱形态学及尿流动力学变化。结果:WGA-HRP注射入膀胱壁内进行逆行追踪,组织切片,四甲基联苯胺(TMB)法呈色,在显微镜下观察,结果显示:膀胱的初级传出神经元在脊髓的分布是脊髓L6部至S1侧角(以L6多见)可见HRP神经元、脊髓L6和S1节段Ⅶ层外侧部,即灰质外侧缘的外侧带,又称骶髓副交感核(SPN)。大鼠膀胱初级传入神经元的胞体分布于L1-S3节段背根神经节(DRG)中,其中主要聚集在L6-S1节段DRG。骶上脊髓损伤组膀胱最大容量较正常对照组减少、逼尿肌漏尿点压较正常对照组明显升高,因此表现为低顺应性膀胱;骶髓损伤组膀胱最大容量较正常对照组增加、逼尿肌漏尿点压较对照组明显下降,因此表现为高顺应性膀胱;骶上脊髓损伤联合双侧L6、SI后根切断组膀胱最大容量较正常对照组增加、逼尿肌漏尿点压较正常对照组也升高,计算后表现为膀胱顺应性较高。结论:根据本次实验结果,明确了支配膀胱逼尿肌的低位中枢——骶副交感神经核(SPN)的位置,以准确造成骶上脊髓损伤和骶髓损伤实验动物模型,同时为下一步实验光感基因的准确导入奠定了基础。明确了膀胱传入神经的主要部分,定位需要切断的骶神经后根,尽最大可能避免引起骶段其他感觉和反射的丧失。并根据尿流动力学结果验证了其可行性。不同节段脊髓损伤后的尿流动力学表现为下一步实验观察光感基因治疗后是否有效确定了比较的基线。