【摘 要】
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猪圆环病毒2型（PCV2）是一个小型的单链环状DNA病毒,会导致仔猪免疫抑制,从而引起多种并发症。PCV2的Cap蛋白是该病毒的唯一结构蛋白,具有多个抗原表位,能够诱导产生中和抗体。单链抗体（Single chain antibody,sc Fv）是免疫学诊断、治疗等领域的重要材料,筛选出PCV2的单链抗体能为该病的检测诊断起到重要的作用。本研究主要通过Novopro蛋白结构预测软件来分析PCV2
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猪圆环病毒2型（PCV2）是一个小型的单链环状DNA病毒,会导致仔猪免疫抑制,从而引起多种并发症。PCV2的Cap蛋白是该病毒的唯一结构蛋白,具有多个抗原表位,能够诱导产生中和抗体。单链抗体（Single chain antibody,sc Fv）是免疫学诊断、治疗等领域的重要材料,筛选出PCV2的单链抗体能为该病的检测诊断起到重要的作用。本研究主要通过Novopro蛋白结构预测软件来分析PCV2-Cap蛋白（GenBank登录号:MF981845.1）的二级结构及相应抗原表位,为了提高蛋白的的表达量去除Cap蛋白N端NLS核定位信号序列,把Cap蛋白的50-234氨基酸序列作为目的片段。通过PCR扩增Cap基因,构建重组质粒p ET-28a-PCV2-Cap后进行原核表达,成功表达大小在37 k Da的可溶性蛋白。用成功表达的蛋白免疫兔子后,抗体效价达到8×10~4。从免疫后的兔子的脾脏提取RNA,再把RNA通过反转录获得c DNA序列,通过PCR扩增抗体重链VH和轻链VL基因,然后将VH与VL使用SOE-PCR拼接成sc Fv基因,将sc Fv基因片段与噬菌体载体p Comb3XSS连接后,电转到ER2738感受态细胞中,再用M13K07辅助噬菌体进行侵染构建噬菌体展示文库。然后以PCV2-Cap为靶蛋白淘选特异性单链抗体,最终成功的淘选到sc Fv。将淘选成功的sc Fv克隆至真核载体p TT5-Fc上进行真核表达,获得重组单链抗体PCV2-sc Fv,而重组抗体的评价中测定EC50为10.68ng/m L。通过噬菌体展示技术,筛选出PCV2相应的sc Fv抗体,为建立快速、准确和及时的检测方法提供了一定可能性,也为该病毒的免疫学检测诊断奠定基础。
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