禽致病性大肠杆菌（Avian pathogenic Escherichia coli,APEC）广泛的分布于自然环境中,可引起禽类一系列的疾病,如腹膜炎、气囊炎、败血症、心包炎等,给养殖业带来巨大危害。细菌生物被膜可使细菌的耐药性提升600-1000倍,导致致病菌难以被药物杀灭,一旦细菌在养殖场的饲料槽、地面以及器械上形成生物被膜,便难以清除,并不断释放致病菌,给养殖场带来持续性危害。寻找可有效抑制细菌生物被膜形成或破坏成熟细菌生物被膜的药物已经成为研究热点。本论文研究了黄芩素对APEC生物被膜形成的抑制作用,并对生物被膜形成过程中的黏附阶段和聚集阶段分别进行了试验,旨在探究黄芩素对APEC生物被膜的抑制作用的具体作用阶段。完成的主要研究工作和成果总结如下:1.抑制APEC生物被膜形成作用的药物筛选本文通过微量肉汤稀释法测定了穿心莲内酯、苦参碱、槲皮素、大黄素、盐酸黄连素水合物、厚朴酚、黄芩素这七种中药提取物和单月桂酸甘油酯对APEC的最低抑菌浓度（MIC）,结果表明,槲皮素、大黄素、单月桂酸甘油酯、厚朴酚的MIC＞256μg/m L;黄芩素MIC为256μg/m L;苦参碱、穿心莲内酯的MIC＞1024μg/m L;盐酸黄连素水合物的MIC＞512μg/m L。而后对这八种药物进行了对APEC生物被膜抑制作用的筛选,结果表明,这八种药物对APEC生物被膜均有抑制作用,且呈现出剂量依赖性。穿心莲内酯、苦参碱、槲皮素、大黄素、盐酸黄连素水合物、厚朴酚、黄芩素、单月桂酸甘油酯的浓度分别为4μg/m L、8μg/m L、1μg/m L、2μg/m L、8μg/m L、4μg/m L、1μg/m L、8μg/m L时,可极显著的抑制APEC的生物被膜的形成（P＜0.01）,此时黄芩素、槲皮素抑制率分别为13.65%、7.32%。当穿心莲内酯浓度在512μg/m L至1024μg/m L之间、苦参碱浓度在128μg/m L至256μg/m L之间、单月桂酸甘油酯浓度在16μg/m L至32μg/m L之间时,对APEC生物被膜形成的抑制量达到一半。当槲皮素、大黄素、盐酸黄连素水合物、厚朴酚、黄芩素浓度分别达到64μg/m L、16μg/m L、32μg/m L、64μg/m L、2μg/m L时,对APEC生物被膜形成的抑制量达到一半,此时抑制率分别为57.69%、50.37%、56.83%、55.98%、54.51%。综合比较,黄芩素抑制效果最好,因此选择黄芩素作为后续试验药物。2.黄芩素体外抑制APEC生物被膜作用的研究测定亚MIC黄芩素对APEC生长曲线的影响。通过结晶紫染色法测定APEC生物被膜生长曲线,并通过结晶紫染色法、光学显微镜观察、激光共聚焦显微镜观察、扫描电子显微镜观察研究了黄芩素对APEC生物被膜形成的黏附阶段、聚集阶段和对生物被膜形成的影响。结果表明,黄芩素在浓度为64μg/m L及以下浓度时对APEC生长基本无影响。生物被膜生长曲线显示,在0-12 h时APEC处于黏附阶段,此时有少量的细菌附着于载体表面,在12-24 h时APEC处于聚集阶段,此时细菌在载体表面形成微菌落,产生胞外基质,在24-48 h时APEC处于生物被膜成熟阶段,此时细菌大量增殖,产生大量的胞外基质。生物被膜抑制试验表明,黄芩素对APEC生物被膜形成的黏附阶段、聚集阶段和生物被膜形成均有显著的抑制作用,不同浓度的黄芩素对黏附阶段的抑制率均高于对聚集阶段的抑制率,对生物被膜形成的抑制率与黏附阶段的抑制率相似,从而推断出黄芩素主要是通过抑制APEC生物被膜形成的黏附阶段来抑制生物被膜的形成。