【摘 要】
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信号转导及转录激活因子（Signal Transducer and Activator of Transcription）简称STAT蛋白,在细胞发育分化以及信号转导和转录调控中发挥着重要作用,STAT4作为STAT家族的一员同样由JAK激酶激活,磷酸化后二聚化入核,激活（ISG）干扰素诱导的基因表达,从而上调Ⅱ型干扰素的表达,在炎症免疫当中起着重要的调控作用。草鱼作为我国重要的养殖鱼类（在淡水养
【基金项目】
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国家自然科学基金（31960735）； 江西省自然科学基金（20171ACB20004）； 江西农业研究系统专项基金（JXARS-04）；
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信号转导及转录激活因子（Signal Transducer and Activator of Transcription）简称STAT蛋白,在细胞发育分化以及信号转导和转录调控中发挥着重要作用,STAT4作为STAT家族的一员同样由JAK激酶激活,磷酸化后二聚化入核,激活（ISG）干扰素诱导的基因表达,从而上调Ⅱ型干扰素的表达,在炎症免疫当中起着重要的调控作用。草鱼作为我国重要的养殖鱼类（在淡水养殖鱼类中占20%）,鱼病的防治可谓重中之重,而草鱼出血病作为对草鱼养殖威胁最大的疾病,必然是我们研究的重点之一。为了研究STAT4在其炎症免疫中发挥的作用,在本研究中,首先我们克隆了草鱼STAT4的开放阅读框（ORF）,其ORF全长为2202bp,编码一个734个氨基酸的多肽链。然后通过系统进化树对比其与其他鲤科鱼类及哺乳动物STAT4的亲缘关系,结果表明其与黑头软口鲦有最高的同源性。并使用在线工具SMART分析了STAT4蛋白的结构域,其包含STATint（N末端结构域）以及SH2两个结构域,表现出较高保守性。经过Q-PCR检测,我们得知正常状态下在肠和鳃中的表达量最高,在脑中表达量极低。在CIK细胞中,按时间梯度加入Poly I:C刺激,Q-PCR检测结果表明Poly I:C刺激刺激后STAT4的表达有明显上调,在24h达到峰值,说明其对刺激有明显回应,表明其在先天免疫中可能发挥作用。而通过过表达和干扰,证明草鱼STAT4能够对草鱼IFN-Ⅰ、IFN-γ2有正面调节作用,进一步说明其在先天免疫中的作用。通过免疫共沉淀实验证明STAT4能够发生二聚化,并且在接下来的亚细胞定位实验中,我们验证了草鱼STAT4在Poly I:C刺激有入核现象,对其调控草鱼干扰素的机制进行了初步探究。综上所述,本实验初步探究了草鱼STAT4在草鱼先天免疫中的作用,克隆并鉴定了草鱼STAT4,证明其通过上调草鱼Ⅰ/Ⅱ干扰素在其先天免疫中发挥作用,为将来更深一步的研究打下了基础。
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