BARX2通过激活GALNT4抑制肝细胞癌增殖和侵袭迁移机制的研究

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目的:BARX2(Bar H-like homeobox 2)是同源域转录因子BAR家族中的成员之一,它在细胞黏附、胚胎发育,尤其是在调控肿瘤细胞增殖和转移中具有重要生物学意义。有研究人员发现BARX2能够调控多种癌症的发生发展,并与患者预后有关,说明BARX2可能是肝细胞癌的一个独立预后生物标志物。但是,目前对肝细胞癌中BARX2的生物学功能的了解依旧存在问题,需要进行进一步科学探索。本研究拟检测在肝细胞癌中BARX2的表达水平及探究其出现异常表达的临床意义,并进一步探索BARX2调控多肽N-乙酰半乳糖氨基转移酶4(GALNT4)影响肝细胞癌增殖和侵袭迁移等过程的相关机制。方法:1.通过生物信息学方法,采用TCGA数据库分析肝细胞癌中BARX2的表达情况及其与病人生存预后之间的联系;2.通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)以及蛋白质印迹法(Western blot),在mRNA水平和蛋白水平分别检测肝癌细胞系和正常肝脏细胞中BARX2和N-乙酰半乳糖胺转移酶4(GALNT4)的表达;3.从细胞的增殖、侵袭、迁移以及血管生成能力等多个方面,通过CCK-8增殖实验、集落形成实验、伤口愈合实验、Transwell侵袭实验和血管形成实验,分别评估过表达BARX2的细胞系的变化;4.通过JASPAR网站分析BARX2和GALNT4之间的结合关系,并使用染色质免疫沉淀(Ch IP)和荧光素酶报告试验进行验证。结果:1.对肝细胞癌中BARX2的表达水平进行分析,利用TCGA数据库中的肝癌数据集发现癌旁正常组织中BARX2表达量较肝癌组织表达高,其低表达为肝癌患者预后较差的一个独立风险因素;2.肝细胞癌细胞系中BARX2表达量明显减少;3.在肝细胞癌细胞系中过表达BARX2后,细胞活力和细胞集落形成显著下降;检测BARX2过表达的肝细胞癌细胞系中GALNT4的表达水平,发现过表达BARX2显著提高了GALNT4的表达水平;4.BARX2通过激活GALNT4发挥抗肝癌活性,能够与GALNT4启动子结合,正向调控GALNT4的表达;5.GALNT4在BARX2对肝癌细胞的增殖,侵袭及迁移调控中起着关键效应分子作用。结论:1.肝癌组织中的BARX2异常低表达或失表达可促进肝癌的增殖、侵袭和迁移,BARX2的低水平表达可能提示肝细胞癌的转移;2.BARX2具有成为预测肝细胞癌患者预后的新分子标志物的潜力,并可能成为肝细胞癌治疗的一种新的靶点;3.BARX2能够与GALNT4启动子结合正向调控GALNT4的表达,并抑制肝癌细胞的增殖能力。
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