目的：Annexins 是一类钙依赖性膜磷脂结合蛋白。Annexin A2 是Annexins家族中的一个重要成员，存在于细胞膜、胞质和胞外。Annexin A2 蛋白在细胞膜构架的形成、膜聚合、内吞和胞吐中均扮演重要角色。Annexin A2 还参与某些病理过程，与心血管疾病、血液病、肿瘤等多种疾病相关。本室通过脊髓损伤动物模型、microarray、体外神经元培养等技术发现：Annexin A2 在脊髓损伤后表达增高，Annexin A2 蛋白对神经损伤有明显保护作用，提示Annexin A2 有望成为神经损伤保护性药物。本研究在原有工作基础上，表达纯化Annexin A2的单体――p36，并将纯化后的p36 蛋白免疫小鼠，运用杂交瘤技术获得抗p36单克隆抗体，以期为进一步研究Annexin A2的体内外功能，以及开发相应的神经保护性药物奠定良好基础。 方法：1）抽提大鼠来源的总RNA,RT-PCR 扩增p36 基因的全长序列，通过TA克隆接入pGEM-T 质粒，蓝白板筛选后进行测序鉴定。2）酶切获得p36 基因全长序列，并将其接入pET-28a(+)表达质粒中，构建成pET-28a－p36 表达质粒，然后转化至BL21 大肠杆菌，筛选、鉴定后，测序验证。3）采用IPTG 诱导表达p36 融合蛋白，利用融合蛋白N 端存在的6 个组氨酸标签，在变性条件下，通过Ni-NTA 柱纯化p36 蛋白。4）将纯化的p36 蛋白与佐剂充分乳化后免疫Balb/c小鼠，等小鼠产生相应抗体后进行杂交瘤融合，并通过筛选获得分泌抗p36 单抗的特异性细胞株。5）将筛选出的细胞株注入Balb/c小鼠腹腔，等产生腹水后收集腹水，并进行抗体的纯化和鉴定。 结果：1）克隆出大鼠p36 全长基因，成功构建pET-28a-p36 表达质粒,在BL21细菌中可成功诱导表达出p36 融合蛋白。2）获得了纯化的p36 融合蛋白。3）获得了抗大鼠p36 特异性单克隆抗体,经鉴定所得单抗可以和p36 蛋白特异结合。 结论：采用IPTG 诱导表达的p36 蛋白经SDS 溶解蛋白沉淀制成的蛋白溶液具有良好的免疫原性；运用杂交瘤技术获得了抗Annexin A2 单体p36的特异性单克隆抗体。