第一章罕见地中海贫血规范化基因诊断临床评价　　目的：(1)对广东省妇幼保健院医学遗传中心目前的罕见地贫规范化基因诊断流程进行效果评价，为其进一步临床推广与实施提供依据；(2)初步了解广东省罕见地贫基因分子流行病学情况。　　方法：(1)回顾分析2013年1月至2015年6月广东省妇幼保健院医学遗传中心罕见地贫基因诊断情况。规范诊断流程为：对表现为MCV≤82fl且HbA2≤2.5％的标本进行--FIL，--THAI和α-珠蛋白基因测序分析；对MCV≤82fl且HbA2≥3.5%的标本进行β珠蛋白基因测序分析；对HbF增高的标本进行Yunnanese(Aγδβ)0、ChineseGγ(Aγδβ)0和SEA-HPFH检查；对异常血红蛋白的标本进行α/β珠蛋白基因测序检查。将338例研究对象分为规范诊断组(209例)与未规范诊断组(129例)，比较两组的阳性率；对未规范诊断组不规范的原因加以分析，发现存在的问题，找出病因；采用SPSS13.0对数据进行统计分析；(2)对2011年广东省地中海贫血流行性现况基线调查样本进行罕见地贫基因检测，共从14332个家庭中采集了男性外周血13148份，其中15.9%常规地贫基因检测为阳性，我们对余下血液学初筛阳性，而常规基因检查呈阴性的进行罕见地贫基因型的分析。根据血常规及血红蛋白电泳结果，对研究对象进行分类：α-地贫特征组(MCV≤82fl且HbA2≤2.5%)，β-地贫特征组(MCV≤82fl且HbA2≥3.5%)，HbF增高组(HbF≥5.0%)，异常血红蛋白组。按罕见地贫基因规范化诊断流程进行检测。　　结果：(1)规范诊断组确诊阳性率显著高于未规范诊断组，差异有统计学意义(P＜0.001)；(2)检测项目的错检、漏检及不合指征是造成未规范检查的主要原因，导致医疗资源的浪费和确诊阳性率的下降；(3)漏检错检项目反应了医务人员对罕见地贫基因的检测项目与临床症状的相关性理论知识掌握有偏颇，可能存在宣传与培训不足的问题；(4)基线调查中，α-地贫特征组检出了4例阳性，检出率为4/200(2%)；β-地贫特征组检出了9例阳性，检出率为9/28(32.14%),；HbF增高组检出了4例阳性，检出率为21.05%(4/19)；异常血红蛋白的检出率为43/43(100%)，总共额外增加了60例地贫基因阳性，检出率为20.69%，包括--THAI/2例，突变型α-地贫2例，ChineseGγ(Aγδβ)01例，SEA-HPFH3例，突变型β-地贫9例，HbQ-Thailand11例，HbNewYork18例，HbG-Chinese6例，HbJ-Bangkok6例，另外还有HbJ-Baltimore和HbOkayama各1例。　　结论：(1)我院罕见地中海贫血的规范化基因诊断的制定与实施临床应用效果良好，可降低漏诊误诊率，显著提高医疗质量。在以后推广的过程中，应注意加强医务人员的学习与简化流程，使罕见地贫基因诊断流程能更好地服务临床；(2)虽然本研究的样本量不足以分析罕见地贫基因的携带率，但是我们希望提供一个较大样本中这些罕见地贫基因型的检出情况，为以后全省罕见地贫基因携带率调查的样本估算等打下基础；(3)本研究发现了2例中国人群首次报道的罕见的异常血红蛋白类型：HbJ-Baltimore和HbOkayama，丰富了中国人群异常血红蛋白基因的种类。　　第二章一种地中海贫血的新突变基因鉴定　　目的：目前已有50余种缺失型α-地贫类型被报道，缺失范围从2.4kb到整个α-珠蛋白基因簇不等。本研究拟对一例新发现的导致α0-地贫的44.6kb缺失突变家系进行基因型鉴定。　　方法：采集临床上一例表型为α0-地贫但α-珠蛋白基因常见缺失与突变检测及第一章提及的罕见地贫基因诊断-检测均提示为阴性的先证者及其家庭成员的外周血。采用MLPA方法检测珠蛋白基因拷贝数变化。为了更好地描述断裂位点，我们针对α-珠蛋白基因簇基于Agilent的芯片技术定制了一款CustomCGH芯片。根据CGH结果设计Gap-PCR引物，将扩增的特异DNA片段进行Sanger测序分析。　　结果：MLPA分析α-珠蛋白基因拷贝数，发现先证者存在大片段缺失，无法确定断裂位点。CustomCGH结果显示先证者16号染色体发生大片段缺失，缺失区域为(hg19)chr16:194277-237673。通过Gap-PCR和Sanger测序验证确定，缺失区域为：(hg19)chr16:194214-238840，缺失大小为44627bp。对家系其他成员分析，推测大片段缺失遗传自父亲，家系其他成员未携带该基因。该缺失片段移除了α-珠蛋白基因簇上的所有功能基因，使α-珠蛋白基因数量从4个减少为2个，解释了先证者血液表型。　　结论：本研究成功鉴定一种导致中国人α0-地中海贫血的新突变，新突变的发现丰富了中国人群的α-地贫基因病变信息。本研究将定制的比较基因组杂交芯片方法成功应用于地中海贫血α-珠蛋白基因簇大片段缺失的检测，完善了罕见地贫基因检测流程，为临床未知缺失型地贫的检测提供了一套可行的新方法。