研究背景及目的:　　胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一。全球范围内其发病率及死亡率分别居恶性肿瘤的第5位和第3位，并成为东亚地区最为流行的肿瘤类型。我国胃癌发病率较高，占常见恶性肿瘤的13.08％。胃癌作为一种不易早期诊断的肿瘤，其生物学行为具有侵袭力强、转移倾向及不良预后等特点。尽管近年来提出多种治疗模式，但由于肿瘤浸润及淋巴转移等因素致使胃癌生存率较低，对放化疗敏感性低，导致缺乏有效治疗方案。因此，寻找合适的分子作用位点将为研发新一代抗肿瘤治疗药物提供重要的方向。　　延胡索酸水合酶（又名延胡索酸酶，FumarateHydratase/Fumarase，FH）是三羧酸循环中催化延胡索酸与水反应生成L-苹果酸的可逆转变的酶，广泛存在于不同细胞内。以往研究证实FH基因缺失或突变会引发癌症，认为其是一种肿瘤抑制基因。最新研究表明，延胡索酸水合酶在不同的细胞部位时可发挥不同的生理功能，当位于细胞核时其通过对基因表达与调控至关重要的过程——组蛋白甲基化来实现破坏DNA修复从而促进肿瘤生长，证实代谢酶在癌细胞一些至关重要的细胞活动中发挥了非代谢功能。为此，本论文拟对FH在胃癌发生发展的作用进行初步研究。　　目前胃癌的化疗方案中，铂类作为一种比较重要的化疗药物被广泛应用，然而铂类耐药是临床常见影响胃癌化疗疗效的重要原因之一。顺铂诱导细胞发生DNA损伤，而FH可诱导细胞发生DNA双链断裂修复，故进一步通过细胞学实验探究FH与铂类药物处理的关系。　　研究方法:　　逆转录定量PCR（qRT-PCR）检测FH在35对胃癌组织及其配对的癌旁正常组织的mRNA水平；Western-blot分析法检测FH在胃癌组织及其配对的癌旁正常组织的蛋白质水平，以及处理后细胞相关蛋白表达量变化；免疫组织化学方法检测FH表达与临床病理间及患者预后间的关系；MTS法检测敲降FH胃癌细胞株对顺铂的敏感性，以探索FH对DNA损失修复的影响。　　结果：　　1．FH在mRNA水平上胃癌组织低于其配对的正常组织（0.0001vs0.0002），差异有统计学意义（P=0.0084）。在蛋白质水平进行定性分析也与前述结果一致。　　2．临床病例的免疫组化切片分析示：所选取的121例患者胃癌组织，几乎所有病例皆有阳性表达（除少数以粘液成分为主的粘液腺癌为阴性表达），但病例间细胞阳性率及染色强度存在差异。染色主要存在于细胞浆中，呈颗粒状弥散其中；也可存在于细胞核中。根据免疫组化评分将所有病例划分为FH高表达和低表达两组（最终评分＞6分为高表达），其中63例（52.07%）属高表达，58例（47.93%）属低表达。另外，结合病例的临床病理学特征数据计算可知，FH表达情况与患者年龄（P=0.011）、肿瘤远处转移（M分期，P=0.016）及TNM分期（c）相关，而与性别、肿瘤浸润深度（T分期）、局部淋巴结转移（N分期）以及有无接受术后辅助化疗无明显相关。关于FH表达情况的生存分析示：FH高表达与低表达患者的中位生存时间分别为21.71个月和28.65个月。Kaplan-Meier生存曲线提示FH高表达组患者近期生存与低表达组相比无明显统计学差异（P=0.1753，Breslow检测），而远期生存则有统计学差异（P=0.0357，Log-rank检测），以M0分组再进行生存分析，M0亚组结果与总体结果一致（P=0.1753，Breslow检测；P=0.0357，Log-rank检测）。利用Cox回归作单因素及多因素分析，发现在排除其他混杂因素后FH的表达情况与预后相关。总体而言FH高表达者总生存期较低表达组差。　　3．体外细胞实验示：选取SGC-7901和MGC803两株胃癌细胞株，分别加入顺铂（DDP）或5-氟尿嘧啶（5-Fu）处理细胞株，选择不同时间点收集细胞并行western-blot分析FH表达情况，顺铂处理组FH表达量随时间延长而增加，而5-Fu处理组则无此趋势。敲降FH后，胃癌细胞形态及活性未发生明显变化，且无论是否经过药物顺铂处理FH均没有表达；阴性对照组FH表达随顺铂处理时间延长而出现与前述实验相似的结果；与组蛋白相关的分子p-H2AX在顺铂未处理组与顺铂处理48h后均有表达，且敲降组表达高于阴性对照组；顺铂处理后24h组表达低于前述各组，而敲降FH的24小时处理组p-H2AX无表达，阴性对照低表达。FH敲降细胞对顺铂的IC50=2.143，比阴性对照组（IC50=2.200）低，提示敲降FH后胃癌细胞对顺铂更敏感。　　结论:　　FH在胃癌发生发展过程中的双重作用：正常细胞转变为肿瘤细胞时具有保护抑制肿瘤形成的作用；肿瘤细胞形成后则成为保护肿瘤免受外界因素损伤的保护因子。