【摘 要】
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背景:砷是有毒的类金属物质,已被证实能诱发多种癌症的发生,其致癌机制有氧化应激、免疫抑制、改变DNA修复等。而砷化物能引起皮肤的病变,主要是因其大部分积累在皮肤角质层,因此,人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)被广泛用于砷制剂对皮肤的毒性效应研究上。众多研究实验已证明长期低浓度砷暴露能诱导HaCaT细胞发生恶性转变形成砷致HaCaT恶性表型细胞(称为AS-TM细胞)。近年来,中药因来源丰富、提取
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背景:砷是有毒的类金属物质,已被证实能诱发多种癌症的发生,其致癌机制有氧化应激、免疫抑制、改变DNA修复等。而砷化物能引起皮肤的病变,主要是因其大部分积累在皮肤角质层,因此,人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)被广泛用于砷制剂对皮肤的毒性效应研究上。众多研究实验已证明长期低浓度砷暴露能诱导HaCaT细胞发生恶性转变形成砷致HaCaT恶性表型细胞(称为AS-TM细胞)。近年来,中药因来源丰富、提取成本较低、副作用较小,其抗肿瘤的作用已成为研究热点。姜黄素是从姜黄的根茎中提取的有效化学成分,具有多种药理作用,如降血脂、利胆、抗炎、降血压、抗肿瘤。实验证明,姜黄素能有效地抑制肿瘤细胞的生长,主要通过作用在调控细胞周期、诱发细胞凋亡、抑制肿瘤的转移及生长、辅助肿瘤治疗的增敏的方面。而姜黄素的抗血管生成作用是抑制肿瘤扩散转移的一个重要治疗靶点。目的:制备AS-TM细胞并接种裸鼠建立动物模型,探究姜黄素对AS-TM细胞的增殖、凋亡、周期及其动物模型肿瘤生长的影响。方法:1.HaCaT细胞培养在含100n M三氧化二砷培养液180天后收集细胞制备AS-TM细胞。2.MTT检测姜黄素对AS-TM细胞增殖的影响。3.流式细胞术Annexin-v/PI双染法检测姜黄素对AS-TM细胞凋亡的影响。4.流式细胞术PI单染法检测姜黄素对AS-TM细胞细胞周期的影响。5.建立AS-TM细胞动物模型,模型建立后随机分为对照组和姜黄素200mg/kg实验组,观察两组动物的饮食、活动、皮色等变化情况,10天测一次肿瘤长径a和垂直于a的最大横径b,计算瘤体积并且绘制肿瘤体积生长曲线(瘤体积=1/2·a·b2),计算抑瘤率=(对照组平均体积一实验组平均体积)/对照组平均体积×100%。6.40天后颈椎脱臼处死所有裸鼠,收集成瘤组织,并做石蜡切片,HE染色在光镜下观察成瘤组织的病理改变。7.免疫组化及RT-PCR检测两组裸鼠肿瘤组织的血管内皮生成因子(VEGF)表达强度。结果:1.MTT实验显示姜黄素可以抑制AS-TM细胞增殖活性。2.流式细胞术Annexin-v/PI双染法检测到姜黄素能促进AS-TM细胞发生凋亡。3.流式细胞术PI单染法显示姜黄素可导致AS-TM细胞周期阻滞于G1期。4.HE染色切片观察,砷致恶变动物模型成功建立。5.姜黄素组的肿瘤体积生长曲线低于对照组,姜黄素组的肿瘤体重低于对照组。6.免疫组化检测到VEGF在姜黄素组阳性率低于对照组。7.RT-PCR检测到VEGFm RNA在姜黄素组的表达低于对照组。结论:本研究成功建立砷致HaCaT恶性表型细胞(AS-TM细胞)动物模型。姜黄素可以抑制AS-TM细胞增殖并促进其凋亡。姜黄素能抑制成瘤组织的生长。姜黄素可能通过下调VEGF的表达而起到抑制肿瘤生长作用。
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