玉米ZmSSRP1基因在籽粒淀粉合成中的功能研究

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淀粉占玉米种子干重的75%左右,淀粉的含量和结构直接决定着玉米种子产量和品质。淀粉代谢途径关键酶的功能及转录、调控已有较多报道,然而在蛋白水平淀粉调控机制却很少。因此,开展粮食玉米淀粉的合成,挖掘新基因,并利用这些基因培育的新品种,是提高作物产量和品质最有效的方法。通过生物信息学分析得到了一个玉米胚乳淀粉调控基因,命名为Zm SSRP1。异源转化水稻获得了过表达过表达水稻植株,并初步对其在淀粉合成中的功能进行了研究和探讨了其调控机制,结果如下:1、生物信息学分析Zm SSRP1为5’-AMP蛋白激酶,由516个氨基酸残基构成,并在其N端含有一个叶绿体转运肽(c TP),C端包含AMPK1_CBM结构域。2、组织表达模式分析:Zm SSRP1在玉米B73各个组织和器官中都有表达,但在胚乳中的表达量显著高于其他组织。3、利用玉米原生质体瞬时表达系统研究发现,Zm SSRP1通过N端定位于质体。4、通过遗传转化获得了过表达过表达水稻植株,对过表达Zm SSRP1水稻和野生型中花11相关指标统计分析发现,相较于野生型,过表达Zm SSRP1水稻种子的千粒重、可溶性糖和蛋白含量显著下降;总淀粉、直链淀粉和支链淀粉含量显著上升;直链淀粉的和支链淀粉的蓝值都高于野生型。5、切片和扫描电镜结果显示,Zm SSRP1过表达水稻种子的胚乳细胞较大,排列疏松,淀粉结构异常。6、对过表达水稻种子中与淀粉合成相关的17内源基因的表达量进行研究,通过q RT-PCR发现,与直链淀粉合成相关的Os GBSSI和与支链淀粉合成相关的OSGBSSII表达量都是高于野生型的,Zm SSRP1蛋白正向调控过表达水稻淀粉的合成。7、通过酵母双杂交实验筛选到一个Zm SSRP1互作的蛋白Zm ISA1(编码异淀粉酶),结合BIFC明确了两个蛋白的相互作用,为后续Zm SSRP1蛋白调控淀粉合成的分子机制研究提供了方向。
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