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目的：观察参芪补肺方对慢阻肺大鼠及气道上皮细胞转录因子Nrf2、miR-146和MUC5AC表达的影响,研究参芪补肺方对气道粘液高分泌调节作用的机制。从分子生物学层次探讨参芪补肺方治疗慢阻肺的作用机制。方法：1.将60只健康wistar大鼠随机分为空白组、模型组、富露施组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。除空白组外给予LPS气道滴入及烟熏造模,并予以相应治疗30天。观察大鼠肺功能、肺泡灌洗液、肺组织病理变化,用Real-Time-PCR和Western blot方法检测肺组织miR-146及Nrf2、MUC5AC mRNA和蛋白表达情况。2.分别给予人气道上皮细胞烟雾溶液、参芪补肺方中药血清、Nrf2-siRNA、Myc3-Nrf2四种干预因素进行干预下培养,观察气道上皮细胞在不同干预情况下的生长状态,用Real-Time-PCR和Western blot方法检测肺组织miR-146及Nrf2、MUC5AC mRNA和蛋白表达情况。结果：1.造模后大鼠FEV0.3/FVC下降,肺呼气及吸气阻力增加,肺顺应性下降。富露施及参芪补肺方均可改善大鼠肺功能水平(p<0.05)。2.造模后大鼠BALF白细胞及中性粒细胞计数显著增高,与空白组比较差异有统计学意义(p<0.05)。富露施及参芪补肺方均可降低BALF白细胞数量,与模型组比较有统计学意义(p<0.05)；但各治疗组之间比较无统计学意义(p>0.05)。3.病理标本示参芪补肺方可减轻支气管上皮的破坏和炎细胞浸润,参芪补肺方中、高剂量及富露施组大鼠的肺组织气道内粘液栓明显减少,接近于空白组。参芪补肺方及富露施均可改善COPD大鼠肺气肿情况,降低病理组织中肺泡占视场比率,二者疗效相当(p>0.05)。4.造模后各组大鼠肺内MUC5AC表达明显增高,参芪补肺方及富露施均可降低肺内MUC5AC的表达,参芪补肺方中、高剂量组与富露施组比较无统计学意义(p>0.05)。参芪补肺方中、低剂量降低肺内MUC5AC mRNA的表达效果与富露施相当(p>0.05)。5.造模后大鼠Nrf2蛋白表达明显增高(与空白组比较,p<0.05)参芪补肺方及富露施可提高Nrf2 mRNA及蛋白表达水平(与模型组比较,p<0.05)。参芪补肺方中剂量与富露施的作用相当(p>0.05),而中药高剂量组Nrf2蛋白表达显著高于富露施组。6.造模后大鼠miR-146表达增加,参芪补肺方和富露施均可提高miR-146的表达,与空白组和模型组比较均有显著差异(p<0.05)。参芪补肺方中、高剂量效果优于富露施(p<0.05)。7.烟雾溶液对细胞活性具有抑制作用,在1%、5%浓度的烟雾溶液中细胞活性下降较平稳,在10%烟雾溶液中细胞活性下降较平缓,但24h后可迅速下降至70%。在25%、50%、100%烟雾溶液中12h后细胞活性下降较迅速,可降至59%、36%、35%。8.烟雾溶液可诱导细胞MUC5AC mRNA、Nrf2 mRNA、miR-146的表达。MUC5AC mRNA表达增加显著,3h点表达程度显著高于0h点(p<0.05)。Nrf2 mRNA、miR-146表达程度增加缓慢,但24h点表达程度显著高于0h点(p<0.05)。9.烟雾溶液可诱导细胞MUC5AC、Nrf2蛋白表达。烟雾诱导3h后细胞MUC5AC蛋白表达出现显著增加(p<0.05)。6h后Nrf2蛋白表达较0h点显著增加(p<0.05),10.siRNA抑制细胞Nrf2表达后,烟雾诱导MUC5AC、miR-146表达增加,呈时间依赖性(p<0.05)。24h点siRNA组与烟雾溶液组、阴性对照组比较,MUC5AC mRNA表达程度显著增加(p<0.05), miR-146表达程度下降,但无统计学意义(p>0.05)。各时间点MUC5AC蛋白、miR-146表达程度与0h点比较均显著增加(p<0.05)。siRNA组与烟雾溶液组、阴性对照组比较,24h点MUC5AC表达程度明显增高(p<0.05)；miR-146表达程度下降,差异无统计学意义(p>0.05)。说明抑制Nrf2表达在一定程度上影响miR-146表达。H.Myc3-Nrf2过表达细胞Nrf2基因后,MUC5AC表达下降、miR-146表达增加,呈时间依赖性。培养6h后MUC5AC蛋白表达增加,与0h比较差异有统计学意义(p<0.05)。培养12h后MUC5AC mRNA表达增加,与0h比较差异有统计学意义(p<0.05),培养24h后,与烟雾溶液组及阴性对照组比较,Myc3-Nrf2组MUC5AC mRNA及蛋白表达显著下降、miR-146表达显著增加(p<0.05)。12.中药血清可促进细胞Nrf2、miR-146表达,抑制MUC5AC过表达,中药血清组miR-146、Nrf2 mRNA及蛋白表达逐渐增高,呈明显时间依赖性。培养24h后各组细胞MUC5AC、miR-146、Nrf2 mRNA及蛋白表达均增加,与烟雾溶液组及空白血清组比较,中药血清组MUC5AC增加程度较低,miR-146、Nrf2明显增加(p<0.05),表明参芪补肺方能提高miR-146、Nrf2的表达。13.中药血清能促进siRNA干预的细胞Nrf2表达,Nrf2 mRNA表达程度较相应对照组增加,但无统计学意义(p>0.05)；与无抑制因素比较表达增加,有统计学意义(p<0.05)。中药血清培养24h后,Nrf2蛋白表达与单纯siRNA干预及空白血清+siRNA干预比较表达增加(p<0.05)但与无siRNA情况下比较,有统计学意义(p<0.05),说明中药血清可以促进Nrf2表达。14.干预细胞24h后,中药血清能降低siRNA干预的细胞的MUC5AC表达,但MUC5AC mRNA及蛋白表达程度与相应对照组比较无差别(p>0.05)；与无抑制因素比较,MUC5AC mRNA表达程度明显增高(p<0.05)。15.中药血清能促进siRNA干预的细胞的miR-146表达,中药血清+siRNA组细胞miR-146表达程度较相应对照组表达增加(p<0.05)。除中药血清组外,其余各组间miR-146表达程度无明显差异(p>0.05),说明参芪补肺方不完全依靠Nrf2途径提高miR-146表达。结论：1.参芪补肺方可以降低COPD大鼠BALF炎症程度,改善肺功能程度,抑制COPD大鼠肺组织病理进程。提高COPD大鼠肺组织Nrf2、 miR-146表达,降低大鼠肺组织MUC5AC水平。2.Nrf2参与调控烟雾溶液诱导慢阻肺发病过程中MUC5AC表达。3.Nrf2部分参与调控烟雾溶液诱导慢阻肺发病过程中miR-146表达。4.参芪补肺方通过Nrf2调节烟雾溶液诱导慢阻肺发病过程中MUC5AC、miR-146表达。