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第一部分:miR-338、NFATc1在NSCLC组织及癌旁组织中表达及关联性分析目的:通过分析miR-338及NFATc1在NSCLC肿瘤组织以及癌旁组织的差异性表达来探究其促癌性和抑癌性以及二者在NSCLC病理发展过程中的关联性。材料与方法:选取2016年1月至2018年12月在中国医科大学附属盛京医院采集20对人非小细胞肺癌组织及邻近的非小细胞肺癌癌旁组织进行研究分析;RT-PCR检测NSCLC组织及癌旁正常组织中miRNAs系列物（miR-143、miR-124、miR-338、miR-137及miR-218）的m RNA表达水平及NFATc家族（NFATc1、NFATc2、NFATc3、NFATc4）的m RNA表达水平,确定miR-338及NFATc1在NSCLC病理组织中的作用;分析二者之间的关联性,分析数据,得出结论。结果:miRNA系列物在NSCLC组织及癌旁组织中的差异性表达:miR-143、miR-124、miR-137及miR-218在癌旁组织中的表达高于在NSCLC组织中的表达,说明其可能具有抑癌特性;miR-338表达差异性最大,抑癌特性最为明显,差异具有统计学意义;NFATc家族在NSCLC组织及癌旁组织中的差异性表达:NFATc1、NFATc2、NFATc3和NFATc4在NSCLC组织中表达含量较高,它们可能具有促癌特性,其中NFATc1分子表达最高,促癌性特点最明显,差异具有统学意义;miR-338及NFATc1在NSCLC组织中的表达关联性分析:在NSCLC病理组织中miR-338的表达与NFATc1的表达体现出负相关性。暨随着miR-338的表达含量上调,NFATc1的表达逐渐降低,通过person相关性分析发现相关性系数为-0.8232,P值为0.0007,差异具有统计学意义。结论:在NSCLC病理发展过程中,miR-338较其它miRNAs表达更加敏感,说明其可能具有抑癌特性;NFATc1较其它NFAT家族成员表达更加敏感,说明其可能有促癌特性;miR-338及NFATc1在NSCLC病理性发展过程中体现出负相关性,在后续的研究过程中将重点讨论上述两种分子在NSCLC病理发展过程中的调控机制。第二部分:miR-338、NFATc1调控NSCLC细胞增殖及EMT过程研究分析目的:分别探究miR-338及NFATc1在调控NSCLC细胞增殖及EMT过程中的作用,为后续研究提供基础。材料与方法:选取人肺癌细胞A549、H1650、SPCA-1、H460、SW900、H226、H1299和支气管上皮细胞系BEAS-2B作为对照进行细胞培养,同时选取第三层单层细胞检测相关指标。RT-PCR检测上述细胞系中miR-338及NFATc1的m RNA表达;确定敏感细胞系A549作为后续研究对象。原代培养A549细胞,选取其第三代单层细胞作为实验材料;细胞转染使用的是Lipofectamine 2000,同时转染miR-338模拟物（50 n M）、miR-338抑制剂（100n M）、si-NFATc1（100 n M）合成miR-338 mimics、miR-338 inhibitor、miR-NC、miR anti-miR-NC、NFATc1的si RNA（si-NFATc1）和si-NC。A549细胞转染48小时后收集总RNA和蛋白,进行相关项目分析:RT-PCR检测miR-338及NFATc1过表达及沉默处理;Brd U检测各组细胞增殖趋势;Western-blot检测上述各组A549细胞的增殖相关蛋白基因PCNA、CDK4、cyclin D1、p27蛋白浓度表达;EMT过程相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin浓度表达分析;分析数据,做出总结。结果:不同NSCLC细胞系中miR-338及NFATc1表达:A549细胞系具有最低的miR-338表达含量,以及最高的NFATc1表达含量,NSCLC各个细胞系数据与对照组相比,差异具有统计学意义;在后续的研究过程中我们选择A549作为研究对象;miRNAs系列物在A549细胞系中的差异性表达:miR-143、miR-124、miR-338、miR-137及miR-218在A549细胞系内的差异性表达中,miR-338的表达含量降低最为明显,体现明显的抑癌性,其他检测的miRNAs系列物与对照组相比也有不同程度的降低。NFATc1调控NSCLC细胞增殖及EMT过程研究:NFATc1在A549细胞内得到沉默表达;当NFATc1表达降低时可以明显的抑制A549细胞的增殖性,体现出促癌特性,两组数据之间比较,差异具有统计学意义;当NFATc1在A549细胞沉默后,可以降低细胞增殖过程中促癌基因PCNA、CDK4和cyclin D1的表达含量,升高抑癌基因p27的表达含量,各组基因同对照组相比,差异具有统计学意义;抑制NFATc1的表达,则可以在上调E-cadherin表达同时下调N-cadherin及Vimentin蛋白表达,降低A549细胞的EMT过程,减缓细胞的增殖及迁移过程,同对照组数据相比,差异具有统计学意义。miR-338调控NSCLC细胞增殖及EMT过程研究:经过不同质粒转染后,miR-338在A549细胞内得到成功的过表达和部分沉默;miR-338过表达可以抑制A549细胞的增殖活性,当miR-338部分沉默后,A549细胞的增殖活性明显升高,差异具有统计学意义。miR-338过表达后,细胞增殖周期促癌相关基因PCNA、CDK4、cyclin D1表达含量降低,抑癌基因p27表达含量增加,细胞的增殖活性降低,差异具有统计学意义;miR-338过表达后,E-cadherin蛋白被相应的上调,相反N-cadherin及Vimentin则被显著下调,差异具有统计学意义;miR-338过表达后,其EMT基因蛋白Snail、Slug、ZEB1表达浓度均出现一定程度降低,P＜0.05,差异具有统计学意义。结论:（1）在众多NSCLC组织细胞系内,A549对miR-338及NFATc1表达最为敏感,所体现出的抑癌性或者促癌性最为明显,论文研究中选择A549作为后续研究细胞系。（2）NFATc1在A549细胞内沉默后,细胞的增殖活性降低,促癌基因PCNA、CDK4和cyclin D1的表达降低,抑癌基因p27的表达增加,细胞的EMT进程降低,体现出明显的促癌性特点;miR-338在A549细胞内过表达后,细胞的增殖活性降低,促癌基因PCNA、CDK4和cyclin D1的表达降低,抑癌基因p27的表达增加,细胞的EMT进程降低,体现出明显的抑癌性特点,与第一部分的研究结论具有一致性,为下文的研究做基础。第三部分:miR-338靶向NFATc1调控NSCLC细胞增殖及EMT过程研究分析目的:探究miR-338靶向NFATc1在调控NSCLC细胞增殖及EMT过程中的作用性分析。材料与方法:选取人肺癌细胞A549细胞进行培养,选取第三代单层细胞作为研究对象;使用Lipofectamine 2000试剂转染miR-338模拟物（50 n M）、pc DNA-NFATc1（100 n M）合成miR-338 mimics+pc DNA3.1、miR-338mimic+pc DNA-NFATc1。A549细胞转染48小时后收集总RNA和蛋白,进行相关项目分析:原代杂交确定miR-338对NFATc1靶向调控作用;Western-blot检测miR-338及NFATc1表达;Brd U检测细胞增殖趋势;Western-blot检测上述各组A549细胞的增殖相关蛋白基因PCNA、CDK4、cyclin D1、p27的表达情况,同时检测与EMT标志蛋白表达水平;进行统计,做出总结。结果:miR-338靶向NFATc1验证分析:NFATc1在miR-338过表达的A549细胞内表达含量最低,NFATc1受到miR-338含量变化影响最为明显,各组miRNAs与对照组相比,差异具有统计学意义。当miR-338过表达后,NFATc1表达含量明显降低,两组数据之间比较,差异具有统计学意义;miR-338靶向NFATc1杂交实验验证分析:miR-338表达的增加可以明显的抑制3’UTR NFATc1野生型的荧光素酶基因活性,对其突变型的影响较小;当其有效的降低miR-338表达含量时可以明显的增加3’UTR NFATc1野生型的荧光素酶基因活性,两组数据之间比较,差异具有统计学意义。miR-338靶向NFATc1调控NSCLC细胞增殖及EMT过程研究:单纯miR-338过表达后,细胞内PCNA、CDK4、cyclin D1等表达含量降低,p27表达含量增加,细胞的增殖趋势降低;而当NFATc1质粒转染后,细胞内PCNA、CDK4、cyclin D1等表达含量出现提升,p27表达含量降低,细胞的增殖趋势增加,差异具有统计学意义。miR-338靶向NFATc1调控NSCLC细胞EMT进程相关基因分析:单纯miR-338过表达后,细胞内N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug、ZEB1表达含量降低,E-cadherin表达含量增加,细胞EMT过程受阻;而当NFATc1质粒转染后,细胞内N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug、ZEB1表达含量增加,E-cadherin表达含量降低,细胞EMT过程加强,差异具有统计学意义。结论:miR-338负向靶向NFATc1对NSCLC细胞做出生理性调控;miR-338过表达可以明显降低A549细胞增殖趋势以及EMT过程,而NFATc1质粒的转染可以明显的减缓上述现象。