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目的探讨FZD8/Ca2+/NFAT信号通路在费城染色体阳性（Ph+）急性淋巴细胞白血病（ALL）耐药中的作用。方法1、收集临床确诊的初诊或者复发的Ph+ALL外周血单个核细胞,Western blot检测FZD8蛋白表达,PCR检测FZD8 mRNA水平;2、设计靶向人FZD8的特异性干扰序列,连接入LV3载体,三质粒系统包装慢病毒颗粒,感染SUP-B15细胞,筛选出稳定下调FZD8蛋白的SUP-B15细胞,应用于后续实验:（1）CCK-8法检测白细胞增殖能力的变化;（2）AnnexinⅤ/7-AAD染色后行流式细胞术测定细胞凋亡率;（3）PI染色后应用流式细胞术检测白血病细胞的细胞周期;（4）定量PCR技术测定白血病细胞FZD8、NFAT、β-catenin、ALDH1的转录水平;（5）Western-Blot技术检测白血病细胞FZD8、NFAT、CD133及β-catenin蛋白。3、不同浓度环孢素作用于SUP-B15细胞,Western Blot检测白血病细胞NFAT蛋白的变化,AnnexinⅤ/7-AAD标记流式细胞术检测细胞凋亡情况;将低剂量环孢素联合伊马替尼,作用72h后检测细胞凋亡,探讨环孢素对SUP-B15细胞伊马替尼敏感性的影响。4、（1）无菌条件下收集初诊或复发Ph+ALL患者外周血单个核细胞,单独培养或者与骨髓基质细胞共培养,观察白血病细胞生长状态的变化;（2）应用骨髓基质细胞OP9与SUP-B15细胞及Ph+ALL患者原代细胞共培养,评价FZD8在骨髓基质细胞对Ph+ALL细胞的保护作用中的作用,其中用到的实验方法包括:（1）AnnexinⅤ/7-AAD标记流式细胞术测定细胞凋亡率;（2）PI染色后应用流式细胞术测定白血病细胞的细胞周期;（3）荧光定量PCR技术检测白血病细胞FZD8、NFAT、β-catenin、ALDH1的转录水平;（4）Western-Blot技术检测白血病细胞FZD8、NFAT、CD133及β-catenin蛋白。结果1、收集6例初诊及3例复发Ph+ALL患者外周血单个核细胞,经Western Blot及PCR检测均可检测到FZD8表达,而健康志愿者外周血单个核细胞未检测到FZD8表达。2、成功构建了携带FZD8 shRNA的慢病毒载体,包装慢病毒,感染SUP-B15细胞,筛选出稳定下调FZD8蛋白的SUP-B15细胞,分别为shFZD8-2,shFZD8-3,应用于后续实验。结果显示:（1）稳定下调FZD8后,白血病细胞对伊马替尼的敏感性升高（P<0.05）;下调FZD8后,SUP-B15细胞G0/G1期细胞比例下降（P<0.05）;稳定干扰FZD8后较干扰前白血病细胞增殖明显增快（P<0.05）;下调FZD8蛋白表达后,SUP-B15细胞CD133蛋白水平降低,CD133及ALDH1mRNA水平下降（P<0.05）;下调FZD8蛋白表达后,白血病细胞总蛋白中NFAT水平下降,NFAT蛋白核转位减少,总蛋白及核蛋白β-catenin水平均未见明显变化。3、环孢素可明显下调SUP-B15细胞NFAT蛋白水平,在低浓度环孢素（2.5μmol/L,5μmol/L）作用下,SUP-B15细胞存活不受明显影响,而在高浓度环孢素（10μmol/L）作用下,可导致细胞凋亡率增加（P<0.05）;与单纯IM组相比,SUP-B15在环孢素（2.5μmol/L）与伊马替尼（10μmol/L）联合作用下,白血病细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。4、骨髓基质细胞OP9对Ph+ALL原代细胞有支持作用,可明显减少白血病细胞凋亡,且在OP9支持下,Ph+ALL原代细胞对IM的敏感性下降;选择体外培养生存状态良好的Ph+ALL原代细胞XZMC进行后续实验。与骨髓基质细胞共培养后,SUP-B15细胞及XZMC细胞FZD8蛋白表达水平及mRNA转录水平均增高,NFAT总蛋白水平及核蛋白水平增高,β-catenin总蛋白水平及核蛋白水平增高。5、稳定下调SUP-B15细胞FZD8表达可部分抵抗OP9细胞对SUP-B15细胞的保护作用;使用低浓度环孢素抑制Ca2+/NFAT信号通路可部分抵抗骨髓基质细胞对Ph+ALL细胞的保护作用。结论1、稳定下调SUP-B15细胞FZD8的表达后,SUP-B15对伊马替尼敏感性增高,该作用可能是下调FZD8后抑制Ca2+/NFAT信号通路实现的;2、骨髓基质细胞对Ph+ALL细胞有明确的保护作用,FZD8/Ca2+/NFAT信号通路可能在其中发挥作用。