论文部分内容阅读
第一部分ADAMTS8过表达对乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究目的:探讨ADAMTS8对乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:1.Western blot技术检测乳腺癌患者的肿瘤组织及相邻的癌旁非肿瘤组织中ADAMTS8的表达水平。2.Western blot技术检测乳腺癌MDA-MB-231,MDA-MB-468,MDA-MB-453,MCF-7,T47D细胞中ADAMTS8的表达水平。3.设计并合成ADAMTS8过表达及对照质粒,将其转染进入MDA-MB-453细胞中;Western blot检测乳腺癌MDA-MB-453细胞中ADAMTS8的表达情况。4.CCK-8法检测转染ADAMTS8过表达质粒对乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖的影响。5.CCK-8法检测转染ADAMTS8过表达质粒对乳腺癌MDA-MB-453细胞化疗敏感性的影响。6.流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测ADAMTS8过表达对乳腺癌MDA-MB-453细胞凋亡水平的影响。7.Western blot技术检测ADAMTS8过表达对乳腺癌MDA-MB-453细胞中P53和C-Myc蛋白表达的影响。结果:1.Western blot检测了乳腺癌患者的肿瘤组织及相邻的癌旁非肿瘤组织中ADAMTS8的表达水平,结果显示,20例乳腺癌患者癌组织中ADAMTS8蛋白表达水平均较癌旁正常组织明显减低(P<0.05)。2.Western blot检测了5种乳腺癌细胞株中ADAMTS8的表达水平,结果显示,相对于其他4种乳腺癌细胞珠,MDA-MB-453细胞中ADAMTS8蛋白表达水平最低,因此在后续研究中,我们使用MDA-MB-453细胞作为研究对象。3.成功构建ADAMTS8稳定过表达的MDA-MB-453细胞株。4.Western blot分析证明MDA-MB-453细胞转染ADAMTS8过表达质粒后,ADAMTS8蛋白表达水平明显升高。5.细胞增殖实验结果显示,与对照组和空白组相比,ADAMTS8过表达的MDA-MB-453细胞增殖能力明显下降(P<0.05)。6.化疗敏感性实验结果显示,ADAMTS8过表达的MDA-MB-453细胞对紫杉醇的敏感性明显增强(P<0.05)。7.流式细胞术结果显示,与对照组和空白组相比,ADAMTS8过表达的MDA-MB-453细胞凋亡水平明显增加(P<0.05)。8.Western blot技术检测结果显示,乳腺癌MDA-MB-453细胞中P53和C-Myc蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:1.稳定转染ADAMTS8过表达质粒能有效提高ADAMTS8表达水平。2.ADAMTS8过表达能够显著抑制MDA-MB-453细胞增殖能力,增强其对紫杉醇的敏感性,并促进MDA-MB-453细胞凋亡。3.抑制P53和C-Myc的表达水平可能是ADAMTS8调控MDA-MB-453细胞凋亡的主要机制。第二部分ADAMTS8过表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制研究目的:探讨ADAMTS8对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:1.将ADAMTS8过表达及对照质粒转染进入MDA-MB-453细胞中;嘌呤霉素筛选ADAMTS8稳定过表达的MDA-MB-453细胞。2.划痕实验检测ADAMTS8过表达对乳腺癌MDA-MB-453细胞迁移的影响。3.Transwell小室迁移实验检测ADAMTS8过表达对乳腺癌MDA-MB-453细胞迁移能力的影响。4.Transwell小室侵袭实验检测ADAMTS8过表达对乳腺癌MDA-MB-453细胞侵袭能力的影响。5.Western blot技术检测ADAMTS8过表达对乳腺癌MDA-MB-453细胞中MMP-7蛋白表达的影响。结果:1.划痕实验结果显示,与对照组和空白组相比,ADAMTS8过表达的乳腺癌MDA-MB-453细胞迁移能力明显下降(P<0.05)。2.Transwell小室迁移实验结果显示,与对照组和空白组相比,ADAMTS8过表达的乳腺癌MDA-MB-453细胞迁移能力明显下降(P<0.05)。3.Transwell小室侵袭实验结果显示,与对照组和空白组相比,ADAMTS8过表达的乳腺癌MDA-MB-453细胞侵袭能力明显下降(P<0.05)。4.Western blot技术检测结果显示,ADAMTS8过表达的乳腺癌MDA-MB-453细胞中MMP-7蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:1.ADAMTS8过表达能够显著抑制MDA-MB-453细胞迁移和侵袭能力。2.抑制MMP-7表达可能是ADAMTS8抑制MDA-MB-453细胞迁移和侵袭能力的主要机制。第三部分ADAMTS8过表达对乳腺癌MDA-MB-453细胞裸鼠移植瘤生长的作用研究目的:通过构建乳腺癌MDA-MB-453细胞荷瘤裸鼠模型,探讨ADAMTS8过表达对乳腺癌MDA-MB-453细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法:1.构建乳腺癌MDA-MB-453细胞荷瘤裸鼠模型:将稳定转染ADAMTS8过表达组、对照组及空白组MDA-MB-453细胞分别种植到Balb/c-nu裸鼠皮下,每只裸鼠注射200μl细胞悬液,含有2×106个细胞。2.每周观察裸鼠体内肿瘤的大小及生长速度,并计算瘤体体积,第28d引颈处死各组裸鼠,随后绘制肿瘤组织生长曲线。结果:裸鼠皮下移植瘤实验结果显示,与对照组及空白组相比,ADAMTS8过表达的乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖速度明显下降,肿瘤体积明显减小(P<0.05)。结论:在体内实验中,ADAMTS8过表达可明显抑制乳腺癌移植瘤生长,提示ADAMTS8具有作为新靶点应用于乳腺癌治疗潜力。