随着人类寿命的延长,对衰老和老年相关疾病的调控机制的重视程度日益增长。研究发现一些与衰老相关的疾病,如心血管疾病、骨质疏松、老年性痴呆等,表现出明显的性别差异,男性患病风险远超女性,而女性在绝经后,这些疾病的患病率也明显升高。这种性别间发病率的差异以及女性更年期后雌激素水平的锐减和相继发生衰老变化,提示雌激素与衰老和老年相关疾病的调控密切相关。17β-E2分子中含有酚类结构,因而高于生理浓度（＞1 μ mol/L）的17β-E2具有较强的直接抗氧化效应,但生理浓度的17β-E2的作用机制与直接抗氧化作用关系不大,主要通过与ER结合而实现。目前已发现多种类型ER,其中经典的ER包括ERα和ERβ。研究已发现,17β-E2能延缓脂氧化低密度脂蛋白引起的VEC的衰老;ERα或β的甲基化与血管衰老和动脉粥样硬化密切相关我们在随后的研究中发现一定浓度的活性氧能诱导人脐静脉内皮细胞衰老,而生理浓度的17β-E2能通过雌激素受体α介导,减少VEC内的氧化应激,减少VEC中两种衰老标志物去磷酸化Rb蛋白和β半乳糖苷酶的表达,从而延缓VEC衰老的发生。自噬是各种真核生物衰老的非常重要的调节机制,有研究证明,自噬能选择性将受损或老化的线粒体特异性包裹成为自噬体,与溶酶体融合,从而完成受损或老化线粒体的降解,有效促进线粒体质量控制,改善线粒体功能。在哺乳动物衰老过程中线粒体自噬明显下降,尤其是对功能缺陷的线粒体降解自噬作用显著降低,进一步导致了细胞衰老和各器官功能降低和老化。在人类冠状动脉内皮细胞中,运用促自噬活性药物可以改善线粒体的功能,减少ROS产物和细胞内的过氧化氢水平,抑制氧化应激诱导的内皮衰老。以上研究表明线粒体自噬、活性氧和细胞衰老存在着密切关联,对线粒体自噬的调控已成为细胞衰老的重要干预靶点。衰老是全社会不可避免的一个话题,如何延缓衰老更是不可避免的一个临床话题,提高老年患者生活水平,甚至逆转疾病,是一个有探究价值的话题。雌激素是一个长久不衰的话题,雌激素作为一个易取易得且研究结果丰富的化学物质,进一步深入研究与衰老关系且应用于临床,必定有良好的社会经济效益。而自噬是当前较热门的一个新生话题,开拓了研究的新领域,从新角度进一步深入认识雌激素与衰老间的关系。为雌激素进入临床的大量研究背景,因此,本论文旨在研究雌二醇对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞衰老模型影响的究。本论文主要包括以下三章研究:第一章:H2O2诱导的HUVECs衰老模型的建立:购买HUVECs细胞株,无酚红全面培养基培养,光镜下观察形态特点。选择对数生长期细胞,用100、150、200、250、300umol/L一系列梯度浓度的H2O2诱导培养诱导24h后,观察细胞形态,CCK-8检测细胞活力,β半乳糖苷酶染色鉴定衰老程度,细胞周期流式分析检测细胞周期分布,western blot检测细胞衰老标志性蛋白（p-Rb、Rb）的表达水平。第二章:不同浓度雌二醇对H2O2诱导的HUVECs衰老的影响及自噬水平的改变的检测。设置低于生理浓度范围、生理浓度范围内、高于生理浓度范围（10-4、10-8、10-12）三种浓度的雌二醇作用于H2O2诱导的HUVECs,β半乳糖苷酶染色蓝染衰老细胞,Western Blot检测HUVECs的衰老标志性蛋白p-Rb及Rb蛋白水平,Western Blot检测HUVECs的自噬标志性蛋白p62及LC3-Ⅱ蛋白水平,对比分析不同浓度及有无雌二醇作用的细胞蓝染百分比、p-Rb及Rb蛋白水平、p62及LC3-Ⅱ蛋白水平表达差异;第三章:雌激素受体α相关基因表达沉默后雌二醇对H2O2诱导的HUVECs衰老的影响及自噬水平的检测应用Sh-RNA/质粒干扰技术,诱导HUVECs内雌激素受体α蛋白相关基因沉默,Western Blot验证干扰效果。予以H2O2诱导衰老,同时给予雌二醇干预。western bolt检测自噬标志性蛋白p62及LC3-Ⅱ蛋白水平,Western Blot检测HUVECs的自噬标志性蛋白p62及LC3-Ⅱ蛋白水平,对比分析各组细胞蓝染百分比、p-Rb及Rb蛋白水平、p62及LC3-Ⅱ蛋白水平表达差异。材料方法:1、HUVECs的培养及H2O2诱导衰老:获取得HUVECs细胞株,在去雌激素无酚红血清培养基培养。选择对数生长期细胞,分别用100、150、200、250、300umol/L一系列梯度浓度的H2O2诱导培养24小时后观察细胞形态,CCK-8检测细胞活力,β半乳糖苷酶染色鉴定衰老程度,细胞周期流式分析检测细胞周期分布,western blot检测细胞衰老标志性蛋白（p-Rb、Rb）的表达水平。2、不同浓度雌二醇对H2O2诱导的HUVECs衰老相关蛋白及自噬相关蛋白的检测。设置10-4、10-8、10-12三种浓度的雌二醇作用于H2O2诱导的HUVECs,β半乳糖苷酶染色蓝染衰老细胞,Western Blot检测HUVECs的衰老标志性蛋白p-Rb及Rb蛋白水平,Western Blot检测HUVECs的自噬标志性蛋白p62及LC3-Ⅱ蛋白水平,对比分析不同浓度及有无雌二醇作用的细胞蓝染百分比、p-Rb及Rb蛋白水平、p62及LC3-1蛋白水平表达差异;3、HUVECs细胞的ERα基因沉默:ShRNA/质粒干扰技术,诱导HUVECs细胞内ERα基因沉默,Western Blot及荧光显微镜下观察验证干扰效果。造模后应用Western Blot检测质粒干扰的HUVECs细胞内衰老标志蛋白（Rb、p-Rb）改变,以及自噬相蛋白（P62、LC3B）的表达改变;结果:1、通过CCK-8、β-半乳糖苷酶染色、细胞周期流式检测、western bolt检测显示200umol/LH2O2可成功诱导HUVECs衰老模型。2、CCK-8、β-半乳糖苷酶染色、细胞周期流式检测、western bolt检测结果显示生理剂量内的雌二醇可改善H2O2所诱导的HUVECs衰老,增加其细胞活力。3、western bolt检测提示雌二醇可改善H2O2所诱导的HUVECs衰老可能与细胞自噬激活相关。4.采用质粒转染基因沉默技术下调雌激素受体α蛋白表达量后,雌二醇可改善H2O2所诱导的HUVECs衰老作用减弱,伴有自噬活性下降。结论:200umol/L的H2O2作用24h可以诱导HUVECs衰老,且诱导效果极佳。生理剂量内的雌二醇可通过激活自噬途径延缓H2O2所诱导的HUVECs衰老,且该作用有雌激素受体α参与介导产生。