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背景和目的炎症性肠病（inflammatory bowel diseases,IBD）是主要发生于回肠、直肠和结肠部位的一种特发性慢性肠道炎症性疾病。其发病机制比较复杂,现已有的研究表明,遗传、环境、免疫和（或）肠道微生物等因素,均可导致肠黏膜损伤、肠道内异物性抗原进入肠黏膜内,诱发黏膜免疫反应,引起肠道组织损伤。大量研究表明,IBD患者肠道菌群及菌群代谢物均发生了改变,但IBD的发病机制中肠道菌群与黏膜免疫的关系仍未完全明了。Ring1基因编码的蛋白Ring1A,属于E3泛素链接酶,具有ring结构域,是转录抑制复合物PRC1的核心组分之一。在细胞核中,Ring1A通过单泛素化组蛋白H2A发挥表观修饰功能,调控目的基因表达。在影响免疫细胞方面,Ring1A促进胸腺中T细胞的早期发育分化;在Th1和Th2细胞极化过程中,Ring1A可分别结合于Ifng和Il4启动子区域,参与Ifng和Il4表达的调控。为探究Ring1更多的影响免疫的机制,本研究利用Ring1-/-鼠构建溃疡性结肠炎模型,分析Ring1对肠道免疫微环境、肠道菌群及其在IBD发病中的作用。研究内容和方法1采用Ring1-/-鼠探究Ring1对葡聚糖硫酸钠（Dextran Sulfate Sodium Salt,DSS）诱导的溃疡性结肠炎发病的作用:将实验分为WT组和Ring1-/-组,给予两组小鼠2.5%DSS自由饮用7天,构建溃疡性结肠炎模型。统计小鼠体重变化率、疾病活动指数（Disease Activity Index,DAI）、小鼠生存率、小鼠结肠长度,并通过实时荧光定量PCR（Quantitative Real-Time PCR,q RT-PCR）、苏木精-伊红染色（Hematoxylin-Eosin Staining,H＆E）和流式细胞术等实验检测小鼠结肠炎症相关指标。2使用Ring1A抑制剂PRT4165验证Ring1A对DSS诱导的溃疡性结肠炎的作用:将实验分为两组,即:对照组和PRT4165组。从-2天给小鼠注射溶剂或PRT4165,连续给药7天,在第0天给予两组小鼠2.5%DSS自由饮用7天,构建溃疡性结肠炎模型,评估疾病指标。3合笼实验探究Ring1缺陷对溃疡性结肠炎发病的影响是否与肠道菌群有关:将实验分为单笼饲养的WT组、单笼饲养的Ring1-/-组、合笼饲养的WT组和合笼饲养的Ring1-/-组,将WT鼠和Ring1-/-鼠放于同一笼饲养两周后,构建溃疡性结肠炎模型,评估疾病指标。4使用抗生素清除小鼠肠道内菌群后,诱导溃疡性结肠炎模型,探究导致Ring1-/-鼠溃疡性结肠炎加重的菌群类别:（1）通过灌胃,给予小鼠联合抗生素（氨苄青霉素（Ampicillin）、甲硝唑（Metronidazole）、新霉素（Neomycin）和万古霉素（Vancomycin））,清除WT鼠和Ring1-/-鼠肠道内细菌,构建溃疡性结肠炎模型,评估疾病指标;（2）通过灌胃,给予WT鼠和Ring1-/-鼠amphotericin B,清除肠道内真菌,构建溃疡性结肠炎模型,评估疾病指标。5使用16S r DNA测序分析差异菌群:在诱导溃疡性结肠炎模型前收集单笼饲养的WT鼠和Ring1-/-鼠的粪便及合笼饲养的WT鼠和Ring1-/-鼠粪便,送测序公司进行16S r DNA测序,并对测序结果进行分析。6使用甲硝唑清除小鼠肠道内阿克曼氏菌和普氏菌后,诱导溃疡性结肠炎模型,验证16S r DNA测序结果:按照200 mg/kg的剂量,连续给小鼠灌胃甲硝唑11天,在第7天给予小鼠2.5%DSS,构建溃疡性结肠炎模型,评估疾病指标。7完全骨髓嵌合体探究Ring1A是否通过调控免疫细胞影响肠道菌群丰度和溃疡性结肠炎发病:将8-10周雄性WT鼠和雄性Ring1-/-鼠辐照8.5Gy X射线处理,并给小鼠过继WT或Ring1-/-骨髓细胞,8周后小鼠骨髓嵌合体构建完成,构建小鼠溃疡性结肠炎模型,评估疾病指标。结果1 Ring1缺陷导致DSS诱导的溃疡性结肠炎加重:喂2.5%DSS 7天后,相比于WT组,Ring1-/-组结肠炎症更严重,表现为体重降低更多（P＜0.05）,DAI评分更高（P＜0.005）,生存率更低（P＜0.05）,结肠长度更短（P＜0.0001）,H＆E染色评分更高（P＜0.05）;流式分析发现,相比于WT组,Ring1-/-组肠道浸润的中性粒细胞明显增多（P＜0.005）;且q RT-PCR检测发现,相比于WT组,Ring1-/-组结肠组织中Il6、Il21、Il23和Ifng表达量更高（P＜0.05）。2 Ring1A抑制剂PRT4165加重DSS诱导的溃疡性结肠炎:使用PRT4165在小鼠体内抑制Ring1A作用后,小鼠溃疡性结肠炎加重,具体表现为:PRT4165组小鼠更早地出现便血和稀便;结肠长度更短（P＜0.005）;结肠黏膜损伤更严重（P＜0.05）。3 Ring1缺陷造成肠道菌群紊乱,加重溃疡性结肠炎:将WT鼠和Ring1-/-鼠放于同一笼饲养后诱导模型发现:（1）Ring1调节肠道菌群稳态,影响溃疡性结肠炎发病;（2）在诱导溃疡性结肠炎模型前,Ring1-/-鼠的肠道菌群已发生改变。4 Ring1缺陷造成的肠炎加重与肠道内细菌有关:（1）清除WT鼠和Ring1-/-鼠肠道内细菌后,两组小鼠在体重变化率（P＞0.05）、DAI（P＞0.05）、结肠长度（P＞0.05）和H＆E组织染色评分（P＞0.05）方面没有明显差异;（2）清除WT鼠和Ring1-/-鼠肠道内真菌后,与WT鼠相比,Ring1-/-鼠肠炎更重,具体表现为体重下降更多（P＜0.01）,DAI评分更高（P＜0.01）,结肠长度更短（P＜0.01）及结肠黏膜组织破坏更严重（P＜0.05）。5 16S rDNA测序结果显示,与WT鼠相比,Ring1-/-鼠肠道中阿克曼菌丰度降低,而普氏菌丰度升高。6清除小鼠肠道内阿克曼菌和普氏菌后,消除了Ring1缺陷造成的溃疡性结肠炎加重:使用甲硝唑清除WT鼠和Ring1-/-鼠肠道内阿克曼菌和普氏菌后,诱导溃疡性结肠炎发现,两组小鼠各个疾病指标没有统计学差异。7 Ring1A通过调控免疫细胞影响肠道菌群丰度和溃疡性结肠炎发病:骨髓嵌合体构建完成后诱导溃疡性结肠炎发现,与过继了来源于WT鼠骨髓干细胞的小鼠相比,过继了来源于Ring1-/-鼠骨髓干细胞的小鼠肠炎更严重。具体表现为:体重降低更多（P＜0.05）、DAI评分更高（P＜0.05）,结肠长度更短（P＜0.005）;肠黏膜结构损伤更严重,浸润的免疫细胞更多,H＆E染色评分更高（P＜0.05）。结论Ring1A通过调控肠道免疫微环境,促进肠道中阿克曼氏菌生长,抑制普氏菌增殖,减轻DSS诱导的溃疡性结肠炎。