【目的】深入探讨p53在滑膜成纤维细胞(FLS)炎症与增生中的作用,包括p53与NF-κB、p38、JNK及其下游促炎症性细胞因子和基质金属蛋白酶(MMP)之间的关系,以及p53对FLS增生相关信号通路的影响,揭示p53在类风湿关节炎(RA)发病机制中的重要作用。【材料与方法】取人膝关节滑膜组织体外培养FLS。(1)分别与0.1 ng/ml、1 ng/ml、10ng/ml IL-1β或TNF-α共同孵育24小时,收集培养上清行ELISA检测细胞因子IL-6、IL-1β以及MMP-1和MMP-13的水平;同时裂解细胞收获蛋白,利用Western Blot方法检测p53和p21等蛋白的表达;(2)用电转法将p53 siRNA(small interfering RNA)转入FLS细胞并设立对照。3日后,或在这些细胞中重复步骤(1),或与IL-1β(2ng/ml)共同孵育15分钟后裂解细胞收集蛋白,用Western Blot方法检测信号通路NF-κB、p38、JNK和ERK激活情况。【结果】(1)TNF-α和IL-1β可以抑制FLS p53表达,并刺激FLS分泌IL-6、MMP-1显著增加(P＜0.001);(2)p53 siRNA可以有效抑制FLS p53表达。在加或不加IL-1β刺激时,p53表达显著下降的FLS分泌IL-6和MMP-1均较对照组显著增加(P值均＜0.05);在IL-1β刺激下,p53 si RNA抑制p53引起P-IκBα、P-JNK和P-p38表达增高;(3)抑制p53引起p21的表达随之而下降;在IL-1β刺激下,p53低表达的FLS P-ERK较对照组增高。【结论】(1)FLS中p53缺陷对滑膜炎症可以产生重要影响:抑制p53表达可以使NF-κB、p38、JNK活性显著增高,进而促进FLS分泌促炎症性细胞因子和MMPs,并且FLS p53缺陷可能对以上分子各自发挥功能存在易化作用;而促炎症性细胞因子增高可进一步抑制p53表达。由此构成的反馈循环可能是RA进展和维持的关键因素。(2)FLS中p53缺陷还可能对滑膜增生可以产生重要影响:除了通过影响细胞因子分泌以调控FLS增生,p53还可能通过影响细胞周期途径的重要分子p21和ERK调控FLS增生。