【摘 要】
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食品的品质很大程度上取决于农产品原料的品质,而农作物的品种是决定农作物品质最为关键的因素。杂交育种是目前改善农产品品质的主要手段,但是在杂交的F1代中经常会出现育性
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食品的品质很大程度上取决于农产品原料的品质,而农作物的品种是决定农作物品质最为关键的因素。杂交育种是目前改善农产品品质的主要手段,但是在杂交的F1代中经常会出现育性下降的现象,这种现象被称作杂交障碍。在被子植物的双受精过程中,植物进化出了精确的调控通路控制花粉管向胚囊生长,最终进入珠孔花粉管破裂完成双受精。而杂交障碍常发生在受精过程,特别是发生在花粉管受到信号诱导定向生长及精子释放的过程。拟南芥作为一种模式植物,是研究花粉管信号导向过程的理想植物。但是在拟南芥中,关于花粉管信号导向诱导的研究成果很少,LRR-RLKs作为植物中最丰富的一类受体蛋白激酶很可能参与这一过程并在其中起到了重要作用。从拟南芥得到的研究成果能够直接的运用到粮食作物和经济作物中,从而提高食品原材料的品质,促进食品工业的发展。本文从基因芯片的分析入手,发现LRR-RLKs在花粉管中会特异的表达,从而首次得到拟南芥中参与花粉管信号导向诱导过程的LRR-RLKs家族中的LL1基因;并从’TAIR种子库获得了缺失突变体种子,通过基因组DNA的提取,设计特异引物进行聚合酶链式反应(PCR)鉴定基因型的方法得到了纯和突变体Ⅲ;T-DNA的插入个数影响到目的基因和周边基因的表达,Southern Blot分析证明T-DNA为多拷贝插入,结果说明突变体lll的表型缺失可能是因为多个基因突变引起;为了进一步确定T-DNA的插入使目的基因LL1失活,提取了拟南芥基因组RNA,设计特异引物进行RT-PCR反应确定了T-DNA的插入使得LL1基因的转录失活,没有相应表达的mRNA,证明男I是纯和突变体;Aniline Blue染色限制性授粉后的柱头,荧光显微镜观察突变体花粉管表型,并对表型分类,作出相应统计,统计结果发现突变体的花粉管表型有异常,但是和野生型的花粉管表型没有显著性的差异,分析说明受体蛋白激酶作用冗余;通过网站对LLl的结构进行了预测,发现LL1是含有两个跨膜域的蛋白,可能定位在细胞膜上;LL1-GFP/GUS融合蛋白载体构建,转原生质体和植物进行细胞定位,确定LL1定位于细胞膜。通过以上实验对LL1功能做了初步的验证和分析,首次得出结论LL1作为LRR-RLKs家族中的一员,很可能参与了花粉管信号导向诱导过程。但因为有多拷贝插入和其他冗余蛋白的存在造成突变体表型不明显,还需要进一步研究证明。
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