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背景和目的多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种慢性自身免疫性中枢神经系统疾病,多为神经系统白质发生多发性炎性改变,主要表现为局灶性炎性浸润、神经细胞脱髓鞘、神经轴突损伤、胶质纤维化增生及钙化等,是导致神经源性膀胱的第二大病因。据文献统计,大约有超过75%的MS患者可有不同程度的泌尿系统症状,轻者表现为尿频、尿急,重者表现为尿潴留、肾积水、膀胱纤维化等,严重影响患者的身心健康。目前MS致神经源性膀胱纤维化的分子机制尚未完全阐明。就目前诊疗MS致神经源性膀胱的手段而言,既往的治疗方法如使用抑制膀胱过度活动的药物来控制膀胱平滑肌的不随意收缩,虽然在短期内有一定的疗效,但长期效果不佳,且膀胱平滑肌细胞仍持续纤维化变性。而纤维蛋白链接因子1(Fibronectin 1,FN1)作为细胞外基质中的主要蛋白可能参与膀胱纤维化,且已有大量的文献证实miRNA与纤维化疾病的发生发展有着紧密联系。因此,本研究拟构建实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型用来模拟MS疾病的发生发展。并以此EAE模型探究miRNA介导FN1合成参与MS致神经源性膀胱纤维化的分子机制,寻找分子靶向治疗的靶点,为控制神经源性膀胱纤维化提供新的治疗方向。方法1.C57BL/6J雌性7周龄小鼠40只,体重20～22g。随机分成EAE组和NC组,其中EAE组30只,NC组10只,并且根据小鼠神经系统症状轻重进行临床评分(Clinical score,CS)。2.待小鼠临床症状稳定后,根据临床评分(clinicalscore,CS)分为将小鼠分为CS1、CS2、CS3组、NC组,每组选取3只小鼠于代谢笼中观察24小时并记录小鼠单次排尿量、排尿次数。然后对小鼠进行称重,异氟烷麻醉处死小鼠后取膀胱组织并测量小鼠膀胱空虚状态下的湿重。3.对小鼠膀胱组织进行HE染色及马松染色4.使用使用 Target Scan(http://www.targetscan.org)等数据库预测可调控 FN1合成的miRAN.5.采用PCR技术检测膀胱组织miRNA及FN1表达量。6.采用Western blot技术和免疫组化检测膀胱组织中FN1蛋白的表达量。7.转染miRNA类似物及拮抗剂,检测其转染效率及FN1表达量。8.双荧光素酶报告基因实验检测miR-219c-5p与FN1的靶向关系。9.体外过表达或敲低miR-219c-5p并进行细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡实验。结果1.EAE小鼠模型CS评分以2～3分居多。2.与NC组相比,EAE模型组小鼠单次排尿量减少、排尿次数增多、膀胱湿重与体重之比增大,且随CS评分加重。3.与NC组小鼠相比,CS3组小鼠膀胱壁内平滑肌成分明显增粗增多,且马松染色结果表明膀胱壁内胶原纤维成分明显沉积。4.miRNA于膀胱平滑肌细胞转染后,发现在转染效率和敲低效率无统计学差异的情况下,仅有miR-219c-5p组达到预期效果。也就是说,当miR-219c-5p过表达时,FN1减少(P<0.001),而当miR-219c-5p被敲低时,FN1增加(P<0.0001)。5.双荧光素酶报告基因实验、Western blot实验证实了 miR-219c-5p可靶向结合FN1 mRNA的3’UTR区,进而调节FN1的合成。6.细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡实验表明miR-219c-5p可通过调节FN1蛋白的合成参与细胞功能活动。结论1、MS致神经源性膀胱纤维化过程中,EAE组小鼠膀胱发生膀胱重塑、膀胱纤维化,且FN1蛋白是膀胱纤维化的关键分子之一。2.miR-219c-5p可靶向抑制FN1蛋白的合成,并一定程度上缓解膀胱平滑肌细胞的纤维化,为MS患者神经源性膀胱纤维化的治疗提供一个新的思路和靶点。