【摘 要】
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湖南牡丹资源具有耐湿热的优良特性,是研究牡丹耐湿热机理,培育耐湿热牡丹新品种的重要资源。近年来,发现了一些新的优良变异株系,但命名较为混杂,有可能是自然杂交形成的优良后代,也有可能是原有资源因环境等因素导致的性状不稳定。本研究主要利用分子标记对现有资源进行分类整理,加以保护和利用。主要研究结果如下:（1）在牡丹叶片完全展开后,从叶柄中更易于提取出质量合格的基因组DNA;明确了牡丹基因组DNA提取过
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湖南牡丹资源具有耐湿热的优良特性,是研究牡丹耐湿热机理,培育耐湿热牡丹新品种的重要资源。近年来,发现了一些新的优良变异株系,但命名较为混杂,有可能是自然杂交形成的优良后代,也有可能是原有资源因环境等因素导致的性状不稳定。本研究主要利用分子标记对现有资源进行分类整理,加以保护和利用。主要研究结果如下:（1）在牡丹叶片完全展开后,从叶柄中更易于提取出质量合格的基因组DNA;明确了牡丹基因组DNA提取过程中的关键因素为提取液种类及浓度和β-巯基乙醇浓度,最佳方案为采用2%的CTAB作为提取液,2%的β-巯基乙醇作为抗氧化剂和螯合剂,用苯酚:三氯甲烷:异戊醇=25:24:1抽提1次即可。（2）从131对引物中筛选出24对扩增稳定、毛细管电泳峰型良好的多态性引物,用于构建湖南牡丹资源核心SSR引物库。（3）采用筛选出的8对Shannon’s指数、PIC值和区分率较高的核心引物,对18份湖南牡丹资源进行遗传多样性分析。UPGMA聚类结果表明,18份牡丹资源的遗传相似系数在0.57～0.86之间。在遗传相似系数为0.57,可将18份牡丹资源分为2大类,宁乡红与其他17份牡丹资源亲缘关系较远,凤丹系列资源与湖南观赏牡丹资源具有很高的遗传相似性。（4）选择PIC值最高的引物PCA1和区分率最高的引物P05就可将18份资源完全区分。根据这2对引物的扩增位点数据构建18份湖南牡丹资源SSR指纹图谱,并将资源的图片、名称、花色、花型、指纹图谱代码等信息录入进行QR编码。最终形成18份湖南牡丹资源的SSR指纹图谱编码,可用于湖南牡丹资源鉴定、保护、杂交育种等研究中。（5）分子鉴定结果表明,19株F1代杂种苗与其母本“凤丹粉”和父本“湘西粉”的遗传相似系数在0.55～0.97之间,其中6株杂种苗为偏父性遗传,13株杂种苗为偏母性遗传。结合表型观测结果表明,19株杂种苗均为真杂种。且子代在花型、花色、小叶分裂情况等方面出现了区别于父母本的中间过渡型。分子标记数据与表型数据均表明19株杂种苗为真杂种。综上,本研究基于正交试验优化改良了湖南牡丹基因组DNA提取方法,为后续试验提供了质量合格的牡丹基因组DNA;构建了湖南牡丹资源核心SSR引物库,为用分子标记技术对湖南牡丹资源的遗传多样性、资源鉴定、构建指纹图谱、分子标记辅助育种等研究筛选了核心引物;分析了湖南牡丹资源的遗传多样性并构建SSR指纹图谱,为阐明湖南牡丹资源的起源奠定了一定基础,为湖南牡丹资源的鉴定提供了技术手段;选用筛选出的核心引物对杂种苗进行了早期鉴定,结合表型观测数据进一步验证分子标记鉴定的准确性。
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