论文部分内容阅读
目的:选择针对pkc-α反义脱氧核寡酸,利用聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)作为载体,作用于肝癌SMMC-7721细胞内,并观察该反义核酸对肝癌细胞的部分生物学作用(对增殖抑制、克隆形成抑制、促凋亡的影响;对肝癌常用化疗药物的敏感性的影响;对基因及蛋白表达的影响),为肝癌的基因治疗提供一种新的基础研究视角。方法:1观察PEI-ASODN对肝癌细胞的增殖抑制作用:RT-PCR筛选pkc-α相对高表达的细胞株SMMC-7721;WST-8法检测PEI-ASODN对细胞的增殖和克隆形成抑制作用;台盼蓝拒染法检测不同时间PEI-ASODN对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。2研究pkc-α-ASODN对SMMC-7721细胞的作用机理:RT-PCR检测药物作用后SMMC-7721细胞株pkc-αmRNA表达的改变;免疫荧光检测pkc-α蛋白表达的改变;Hoechst 33258染色,PI染色,PI-ANNEXINV双重染色仪检测细胞凋亡情况。3 WST-8法检测肝癌细胞SMMC-7721的药物敏感性变化:检测As2O3、5-FU和HCPT联合PEI-ASODN对肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用。结果:1 SMMC-7721的pkc-a mRNA相对高表达;pkc-αASODN最佳质量比为0.75:1~1:1;PEI-ASODN在不同时间和浓度下对SMMC-7721细胞的具有明显的增殖抑制作用,且具有剂量-效应关系。2 PEI-ASODN能够显著抑制SMMC-7721细胞pkc-αmRNA和蛋白的表达,抑制率达50.9%:PEI-ASODN能够显著显著诱导细胞凋亡。3 PEI-ASODN提高了肝癌细胞对5-Fu、As2O3和HCPT的敏感性,增敏倍数为分别为4.01、1.84和2.86。结论:1当PEI/ASODN的质量比为0.75:1时,PEI携带pkc-αASODN投递肝癌细胞的效率最高;2 PEI-pkc-αASODN能高效抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖;3 PEI-pkc-αASODN能够有效抑制pkc-a mRNA和蛋白质的生物合成;4 PEI-ASODN能够促进细胞凋亡;5 PEI-ASODN联合化疗药物5-FU、As2O3、HCPT作用于SMMC-7721细胞,可以提高细胞对这些化疗药物的敏感性。