梨（Pyrus）果实风味受多种因素影响,有机酸（Organic acid）是重要影响因素之一,且不同种类的有机酸给人不同的口感。有机酸在梨果实中的合成机理已有较多报道,但其积累调控机理尚不清楚;本研究以不同的梨属种质资源为研究材料,筛选参与果实苹果酸积累的功能基因和转录因子,为解析梨果实酸度分子调控机制,梨果实发育过程中品质调控及遗传改良奠定基础。主要研究结果如下:1.PbPH5参与梨果实苹果酸的积累。近些年来P型质子泵基因的功能逐步得到解析,P3亚家族有两个分支,P3A参与H+的跨膜转运,本研究以拟南芥P3A-ATPase亚家族为参考,比对查找并通过系统发育分析确定梨中的P3A-ATPase亚家族;分别测定了多个梨品种（‘砀山酥梨’、‘早酥’、‘黄金梨’、‘阿巴特’和‘金香水’）在不同发育时期的基因表达量与苹果酸含量,经相关性分析后筛选到具有显著正相关性的候选基因PbPH5,相关性系数分别为0.915**,0.932**,0.900**,0.656*和0.518*（P＜0.05或P＜0.01）。在拟南芥原生质体中过表达PbPH5-GFP基因,发现其定位于液泡膜,系统发育分析结果表明,该基因与其他物种已经报道的同源基因具有高度的同源性,如矮牵牛（Peunia hybrida）,苹果（Malus domestictica）,柑橘（Citrus reticulata）等,表明该基因的功能较为保守。通过瞬时转化体系在‘早酥’梨成熟果实中瞬时过表达该基因后,果肉中过表达部位的苹果酸含量升高;瞬时沉默该基因后,沉默部位的苹果酸含量降低;随后通过稳定遗传转化番茄（Lycopersicon esculentum）进一步验证了PbPH5的功能,与对照相比,在过表达该基因的番茄成熟果实中苹果酸和柠檬酸含量显著增加;这些结果表明PbPH5基因参与梨果实中有机酸的积累。2.转录因子PbPH3参与梨果实中有机酸的积累调控。通过相关性分析,在‘砀山酥梨’中筛选到4个可能参与调控梨果实酸度的候选基因。进一步通过系统发育分析和多个品种（‘红酥脆’、‘翠冠’、‘秋香’及‘寒红’）的相关性分析结果发现Pb WRKY26（a）与其他物种中已报道的转录因子亲缘关系最近,并命名为PbPH3,且PbPH3基因表达量与苹果酸含量具有显著相关性,相关性系数分别为0.871**,0.748*,0.889**和0.910**（P＜0.05或P＜0.01）。PbPH3基因的转基因愈伤组织中苹果酸含量显著增加,但PbPH5基因的表达量没有显著变化。双荧光素酶活性分析和酵母单杂交试验结果进一步验证了PbPH3不能直接结合PbPH5基因的启动子。通过RT-q PCR对转基因愈伤组织中的ALMT和MDH家族基因的表达量进行检测,结果显示这两个家族中的部分基因表达量显著上调或下调,这说明PbPH3基因可能通过其他分子途径参与梨果实中有机酸的积累。