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目的:研究益生菌对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导结肠炎大鼠Th1/Th2细胞平衡的调控,探讨益生菌防治溃疡性结肠炎可能的免疫机制及途径。方法:SPF级SD雄性大鼠34只,按完全随机的方法分为2组,A正常组(n=9)和模型构建组(n=25)。在用TNBS+无水乙醇构建溃疡性结肠炎模型后第2天,从A组和模型构建组中分别随机选取1只大鼠,处死后取结肠组织行病理切片,验证结肠炎模型构建成功。再将模型构建组随机均分为3组:B组:模型组(n=8);C组:益生菌干预组(n=8);D组:柳氮磺吡啶干预组(n=8),并对组内大鼠进行标号。造模完成后,A组和B组大鼠使用蒸馏水按1ml/只.天,一次性灌胃,连续1周;C组和D组将计算好的用药剂量溶于1ml蒸馏水中灌胃,连续1周。每天观察大鼠的活动力、精神状况、毛色、进食、大便及体重变化等情况,并详细记录,根据大鼠体重变化、大便性状及便血情况行DAI评分。第8天,处死各组大鼠,取出结肠,迅速用冰冷PBS冲洗结肠至干净,再用干燥、清洁滤纸将结肠表面的水份吸干。宏观检查结肠损伤情况并进行评分后,按组间及组内大鼠编号的不同,分别将每只大鼠的部分组织标本置于13%的中性甲醛固定液中固定24小时,待行石蜡包埋、HE染色及免疫组化法检测T-bet和GATA-3。余下部分同样按组间及组内大鼠编号的不同,称重后用铝箔纸包好,迅速放入液氮(-196℃)中冷冻,尽快转入超低温冰箱(-80℃)中存放,待行ELISA法检测IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10。结果:1.A组大鼠在整个实验进程中活动情况佳、进食正常、重量增加、未出现腹泻及便血。其余三组大鼠在行TNBS造模处理后均出现不同程度活动和进食减少、体重不增或减轻、腹泻及便血。其中,B组和D组各死亡1只大鼠。C组大鼠经益生菌干预后基本情况较B组好转,活动和进食增加、体重缓慢增加、腹泻及便血减轻,并可见成形大便,未见明显血便。D组大鼠经柳氮磺吡啶干预后活动和进食增加、体重增加、腹泻及便血减轻,大便成形。在分别经益生菌和柳氮磺吡啶干预后,从第3天开始,C组和D组大鼠与B组大鼠相比较出现DAI评分的统计学差异(P<0.05),但C组和D组相比无统计学意义(P>0.05)。B组大鼠在第6天基本情况最差,DAI评分最高。2.结肠组织宏观评分及镜下病理学评分:A组大鼠肠壁厚度、黏膜皱襞正常,无充血水肿及出血;镜下肠壁各层结构完整,腺体排列整齐。B组大鼠局部肠壁厚度增加,肠腔变形,皱襞纹理粗乱,可见充血水肿、出血、糜烂及大小不等溃疡形成;镜下见黏膜上皮坏死脱落,杯状细胞减少,腺体断裂、排例紊乱,可见隐窝脓肿及深达肌层的溃疡形成。C组和D组大鼠肠壁厚度均匀,黏膜皱襞清晰,未见粘连,无明显充血水肿及出血,较B组明显改善。C组和D组较B组肠道上皮细胞及腺体破坏减轻,炎性细胞浸润减少,溃疡不同程度愈合。C组和D组组织形态学及镜下病理学观察见不同程度改善,与B组相比存在有统计学意义(P<0.05)。C组和D组相比,组织形态学及镜下病理学差异无统计学意义(P>0.05)。3.各组结肠组织IFN-γ、IL-12、IL-4和IL-10的表达:B组大鼠结肠组织ELISA法测得Th1细胞因子IFN-γ和IL-12的含量显著增加,与A组相比变化差异存在显著性意义(P<0.01);B组Th2细胞因子IL-4和IL-10含量明显减少,与A组相比差异存在显著性(P<0.01)。C组、D组和B组三组相比:C组和D组与B组相比较,IFN-γ和IL-12的含量明显下降,且变化差异有统计学意义(P<0.05);IL-4在两药物干预组结肠组织中的含量明显升高,其变化差异与B组相比有统计学意义(P<0.05);IL-10在两治疗组结肠组织中的含量均升高,仅C组变化差异存在统计学意义(P<0.05)。4.与A组相比,B组T-bet的表达强度明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);经益生菌及柳氮磺吡啶干预后T-bet在C组和D组的表达强度与B组相比,差异有统计学意义(P<0.05);C组和D组之间表达无显著性差异(P>0.05),但从表达均值来看,C组(0.39)低于D组(0.41)。与A组相比,B组GATA-3的表达强度稍有增强,但差异无统计学意义(P>0.05);在经益生菌和柳氮磺吡啶干预后,C组和D组GATA-3的表达强度增加,与B组相比较,其表达强度变化差异均存在有统计学意义(P<0.05),C组和D组表达强度差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.TNBS+无水乙醇灌肠可构建大鼠溃疡性结肠炎的理想模型。2.在TNBS+无水乙醇构建的结肠炎大鼠模型中,Th1细胞因子IL-12和IFN-γ表达增加,Th2细胞因子IL-4和IL-10表达减低。3.益生菌可以促进TNBS所诱导结肠炎大鼠Th2细胞因子IL-4和IL-10的产生,抑制Th1细胞因子IL-12和IFN-γ的产生,由此推测益生菌可能通过调节Th1/Th2细胞因子的平衡,从而发挥抗炎及免疫调节作用。4.益生菌能诱导Th2细胞特异性转录因子GATA-3的表达,抑制Th1细胞特异性转录因子T-bet的表达,说明益生菌可能通过影响细胞转录因子的表达进而调节Th1/Th2细胞的平衡。