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目的大肠癌是严重威胁我国人民健康的恶性肿瘤之一。p53凋亡刺激蛋白2（apoptosisstimulating protein of p532,ASPP2）是近年来发现的细胞凋亡调节家族——ASPP家族中结构最完整的家族成员，作为调节p53凋亡功能的重要抑癌基因，它能够特异性增强p53介导的细胞凋亡通路。而在75%的散发大肠癌中p53存在突变或失活。本课题旨在揭示在p53失活状态下，ASPP2对奥沙利铂诱导的大肠癌细胞凋亡的影响，并深入探讨其对细胞自噬所起的作用。方法第一部分实验：使用ASPP2腺病毒感染法(rAd-ASPP2)使细胞过表达ASPP2基因。细胞给予含100uM奥沙利铂（L-OHP）的高糖培养基（DMEM）培养12小时，观察细胞凋亡和细胞自噬水平。Calcein/PI吸收试验和annexin V–PI试验用以观察各组细胞调亡水平。细胞转染红色荧光蛋白标记的CFP-Lc3自噬质粒，荧光显微镜下观察各组细胞自噬水平；Western-blot法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ表达水平。细胞给予含100uM奥沙利铂（L-OHP）的高糖培养基（DMEM）培养4小时，提取RNA，RT-PCR法检测细胞凋亡及细胞自噬相关基因表达水平。第二部分实验：提取大肠癌标本及癌旁正常组织，提取组织RNA，反转录成cDNA后，使用ASPP2引物进行扩增，检测大肠癌标本及癌旁标本ASPP2表达水平。大肠癌标本及癌旁组织进行冰冻切片，包埋固定后，免疫荧光技术检测大肠癌标本与癌旁组织ASPP2与凋亡基因caspase3的表达情况及其相关性。第三部分实验：rAd-ASPP2腺病毒感染GFP-LC3标记小鼠，奥沙利铂注射后，取小鼠肠组织，观察ASPP2表达水平与自噬水平的相关性。结果第一部分：ASPP2过表达显著增强非p53依赖下的细胞凋亡水平rAd-ASPP2组（21.13±1.03），rAd-GFP组（7.17±0.61）， P <0.01。同时ASPP2过表达能显著抑制非p53依赖下的细胞自噬水平，rAd-ASPP2组（19.57±2.76），rAd-GFP组（40.17±3.86），P <0.01。第二部分：在人大肠癌组织中ASPP2基因表达水平（2.11）低于癌旁正常组织（3.54）P <0.05，而免疫荧光法检测的ASPP2及caspase3表达水平结果呈正相关。第三部分：在奥沙利铂处理后的ASPP2单倍体缺失小鼠自噬水平明显高于正常小鼠而ASPP2过表达小鼠的自噬水平显著低于正常对照组小鼠。结论1.与癌旁非肿瘤组织相比，ASPP2mRNA在结肠肿瘤组织中的表达显著降低。2. ASPP2能够通过抑制细胞自噬促进非p53通路介导的L-OHP诱导的细胞凋亡。3. ΔASPP2对细胞自噬无影响，但能拮抗ASPP2及p53对细胞自噬的抑制作用。4. ΔASPP2能拮抗ASPP2的p53依赖性及非p53依赖性细胞凋亡，及p53介导的细胞凋亡。