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研究背景及目的胚胎形态发生素Nodal是胚胎发育过程中一个重要的调节因子，也是转化生长因子β(Transforming growth factor-β,TGF-β)超家族的成员之一。作为诱导早期胚胎信号的关键成分，Nodal参与了中胚层和内胚层之间的形成、前后体轴位置的确定和左右体轴不对称发育等一系列关键性事件，对脊椎动物的早期发育有重要作用[1-3]。正常情况下，Nodal的表达主要局限于胚胎组织，包括滋养层细胞，增生期子宫内膜和发育中的乳腺等组织，而正常人体发育成熟的组织中不表达或仅有极低的表达[4-6]。随着研究的深入，更多研究发现Nodal在多种人类恶性肿瘤如恶性黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌和胰腺癌中重新表达[7-9]，它具有促进肿瘤细胞生长、侵袭和转移的作用，但Nodal在结肠腺癌中是否表达尚不清楚。转移是恶性肿瘤重要特性之一，转移的机制可能有上皮—间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）[10]，细胞黏附(Cell Adhesion)的改变和细胞发生迁移。研究表明，转移的发生与胚胎干细胞相关基因上调有关，其中Nodal就是促进早期浸润性事件发生的关键性胚胎因素，而上皮钙连接素(Epithelial cadherins，E-cadherin)[11]是上皮—间质转化中非常重要的蛋白。细胞增殖核抗原（Ki67）能较好的反应肿瘤细胞的增殖状态，其标记指数与肿瘤的恶性程度、侵袭转移能力及预后高度相关，因此，它已被广泛地应用于测定各种肿瘤细胞的增殖活性[12-14]。为此本研究目的为：1.免疫组化检测Nodal分别在正常结肠黏膜、结肠腺瘤及结肠腺癌组织中是否表达；2.Nodal在三种组织中的表达情况是否存在差异，以及Nodal，E-cadherin和Ki67的表达与结肠腺癌患者的临床病理特征是否有关；3.用Western Blot方法检测正常结肠黏膜和结肠腺癌组织中Nodal蛋白的表达，其结果是否与免疫组织化学检测方法结论一致。材料及方法1.免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）Envision法查阅泸州医学院附属医院病理科2012年1月至2012年9月的存档资料，筛选出结肠腺癌100例，结肠腺瘤23例，正常结肠粘膜23例（均为结肠腺癌根治术中肿瘤远端切缘）。所有病例均经过泸州医学院病理科两位高年资病理医生盲法确诊。通过入院病历、手术记录、检查报告单及相应的所有HE病理切片收集患者的相关资料，包括年龄、性别、临床Dukes分期、肿瘤分化程度、浸润深度以及淋巴结转移情况，并记录。将上述146例病人对应的组织切片，并进行免疫组织化学染色，所用抗体包括Nodal，E-cadherin和Ki67。2.蛋白免疫印迹（Western Blot）从2013年4月25日开始到泸州医学院附属医院手术室收取新鲜结肠黏膜组织，主要为结肠腺癌根治术中切下的结肠腺癌肿瘤组织和肿瘤远端结肠组织，共16例。用Western Blot检测所有16例新鲜组织中Nodal蛋白的表达。结果1.IHC结果显示Nodal在结肠腺癌中的阳性表达较其正常结肠黏膜和结肠腺瘤组织中的表达明显增高，其阳性率分别为正常结肠黏膜组织43.5%，结肠腺瘤65.2%，结肠腺癌组织97%（P＜0.001）。2.对100例结肠腺癌IHC切片进行相关性分析发现，Nodal的表达与肿瘤分化程度（r=0.362，P＜0.001），浸润深度（r=0.350，P＜0.001）及Dukes分期（r=0.253，P=0.011）呈正相关，且在结肠腺癌组织中，Nodal与E-cadherin的表达呈负相关（r=－0.264，P=0.008）；与Ki67的表达呈正相关（r=0.251，P=0.012）。3.Western Blot结果显示，Nodal蛋白在结肠腺癌组织中的表达明显高于相应的正常切缘黏膜组织，此结果与IHC结果一致。结论1.本实验表明，Nodal在正常结肠黏膜组织和结肠腺瘤组织中低表达，而在结肠腺癌组织中高表达。2.Nodal的表达与肿瘤分化程度、浸润深度及Dukes分期有关，表明Nodal的表达可能增加了结肠腺癌细胞的侵袭和转移能力。3.与E-cadherin和Ki67的相关分析提示，Nodal可能有促进结肠腺癌细胞增殖和转移的能力。4.对Nodal蛋白进行检测有望成为结肠腺癌临床诊断、分级、分期等的一项新指标，还可能为临床提供治疗方案和判断预后提供参考。