细菌群体感应信号分子降解基因aiiA的功能研究

来源 :中国科学院武汉病毒研究所 | 被引量 : 2次 | 上传用户:chenyuxun2005
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群体感应(Quorum sensing,QS)是一种细菌细胞通讯机制,即细菌通过合成、分泌称为自诱导物(autoinducer,AI)的信号分子,当AI浓度随着细菌不断生长、群体密度达到一定阈值时,启动特定基因的表达。N-乙酰高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactones,AHLs)是革兰氏阴性细菌群体感应系统的信号分子。来源于一些细菌的aiiA(acyl-homoserine lactonase)基因编码AHLs水解酶,通过水解AHLs的内酯键,产生脂酰高丝氨酸,使AHLs信号分子失活,降低了AHLs分子的浓度从而干扰群体感应系统。本论文将来源于苏云金芽胞杆菌的群体感应信号分子降解基因aiiA分别在铜绿假单胞菌和烟草表达,对其功能进行了研究,获得了以下结果:   将aiiA基因在铜绿假单胞菌标准株PAO1和两种临床耐药菌株中表达,检测了弹性蛋白酶和绿脓菌素等重要的毒力因子,发现表达aiiA基因的菌株中毒力因子的含量明显少于野生型对照和空载体对照;与运动性相关的群游运动(swarming motility)测定也表明,aiiA基因的表达影响了细菌的群游运动。进一步通过液体和固体表面形成细菌生物膜(biofilm)的差异进行比较以及对生物膜的结构进行扫描电镜观察,结果表明aiiA基因的表达对铜绿假单胞菌生物膜的形成和分散有重要影响,同时通过药敏实验发现aiiA基因的表达还能明显降低铜绿假单胞菌的耐药现象,增强对广谱抗生素的敏感性。这些研究结果表明aiiA基因的表达不仅能够降低毒力因子的表达,影响生物膜的形成,还能够达到降低细菌耐药性的效果。   将aiiA基因构建到植物表达载体转化烟草,接种植物病原细菌胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)和真菌核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum),发现转化烟草抗病效果均显著增强,表现出广谱的抗病现象。其中,AiiA蛋白能通过降解胡萝卜软腐欧文氏菌QS系统中的AHLs信号分子,增强植物对胡萝卜软腐欧文氏菌的抗性。此外,通过对核盘菌侵染关键作用因子草酸含量的HPLC测定,发现转化烟草表达的AiiA蛋白可能通过降解草酸减弱核盘菌对植物的侵染。
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