目的： 1．探讨正常妊娠大鼠不同胎龄胎鼠肺中Ghrelin的表达特点。 2．探讨Ghrelin在先天性膈疝大鼠模型胎肺发育过程中的变化和可能的作用。 3．探讨地塞米松对先天性膈疝胎肺中ghrelin表达的调节作用。 方法: 1．动物模型的建立将雌雄SD大鼠合笼过夜，翌日阴道涂片镜下检及精子视为妊娠，当天定为妊娠第0天。Nitrofen实验组以及Dex治疗组大鼠于妊娠第9.5天在吸入乙醚浅麻醉下插胃管，注入溶于1ml橄榄油的Nitrofen100mg，对照组大鼠仅注入1ml橄榄油。Dex组大鼠于18.5天和19.5天分别腹腔注射地塞米松(0.4mg/kg/d)。对Nitrofen诱导组孕鼠于妊娠第17.5，19.5，21.5天和对照组于妊娠第15.5，17.5，19.5，21.5天，行剖宫产取出胎鼠，称重后外科显微镜下解剖胎鼠，观察膈肌缺损情况，大小以及疝内容物；取出左右胎肺。视胎鼠有无膈疝将Nitrofen组胎鼠分为CDH组和无CDH组。Dex组则在妊娠第21.5天取出胎肺。胎肺取出后放于1.5ml EP管暂存于冰上。用于分子生物学检测的胎肺标本存于-80℃冰箱备用；用于免疫组化检测的标本则于10％甲醛溶液中固定24h，二甲苯透明，梯度酒精脱水，石蜡包埋，做3μm厚连续切片后备用。 2．实时荧光定量RT-PCR(QRT-PCR)检测Ghrelin mRNA在胎肺中的表达Trizol法提取胎肺标本总RNA，核酸定量仪检测各标本总RNA浓度，并用1％琼脂糖凝胶电泳鉴定总 RNA 的完整性。采用一步法实时荧光定量 RT-PCR(Taqman 探针法)技术检测各标本中 Ghrelin 和内参β-actin mRNA的浓度(由标准曲线计算得出)，然后分别经过内参校正和对照样本校正得出各胎肺标本中Ghrelin的相对表达量。 3.免疫组化检测胎肺标本中Ghrelin的表达采用二步法对胎肺中Ghrelin的表达进行免疫组织化学检测，DAB显色，棕黄色示Ghrelin免疫活性阳性。 结果: 1.CDH大鼠模型的构建对照组的8只孕鼠得到胎鼠95只。Nitrofen实验组12只孕鼠得到胎鼠134只，其中膈疝组(CDH组)88只，占65.67％(36/52)；2只地塞米松治疗组孕鼠共产胎鼠26只，有膈疝的有16只，占61.54％；均为发生在后外侧的巨大膈疝。疝入胸腔的腹腔脏器主要为肝脏和胃，小肠和脾脏也有疝入。 2.QRT-PCR法检测Ghrelin在胎肺中的表达 2.1 Ghrelin在正常大鼠不同发育时期胎肺中的表达以21.5天胎龄的胎肺作为对照样本，21.5天的Ghrelin的相对表达量为1.00±0.24；15.5天，17.5天，19.5天胎龄的胎肺Ghrelin表达量分别为11.64±3.50，3.10±0.95，1.42±0.76。其中15.5天胎龄的胎肺Ghrelin表达量与其它三个组的比较有统计学差异(P<0.01)。17.5天与19.5天，21.5天的Ghrelin表达量有统计学差异(P<0.01)，19.5天与21.5天的则无统计学差异(P=0.159)。 2.2 Ghrelin在CDH组大鼠不同发育时期胎肺中的表达以21.5天胎龄大鼠作为参照样本，17.5天，19.5天，21.5天胎龄的胎肺Ghrelin的相对表达量分别为5.96±1.25，2.80±0.48，1.00±0.37。Ghrelin在三个不同时期(17.5，19.5，21.5天)胎肺中的表达均有统计学差异(P<0.01)。 2.3 Ghrelin在17.5天胎龄胎鼠肺中的表达情况以对照组作为参照样本，对照组，CDH组和无CDH组胎肺Ghrelin的相对表达量分别为1.00±0.24，6.74±1.41，7.29±1.36。CDH 组和无CDH组的Ghrelin表达量比对照组高，差异具有统计学显著性(P<0.01)。CDH组和无CDH组间差异则无统计学显著性。 2.4 Ghrelin在19.5天胎龄胎鼠肺中的表达情况以对照组作为参照样本，对照组，CDH组和无CDH组胎肺Ghrelin的相对表达量分别为1.00±0.38，7.64±1.3，7.45±1.20。CDH组和无CDH组的Ghrelin表达量比对照组高，差异具有统计学显著性(P<0.01)，CDH组和无CDH组间差异则无统计学显著性。 2.5 Ghrelin在21.5天胎龄胎龄胎鼠肺中的表达情况以对照组作为参照样本，对照组，CDH组，无CDH组和Dex组胎肺Ghrelin的相对表达量分别为1.00±0.24，4.31±1.58，3.62±0.67，1.27±0.26。CDH组和无CDH组的Ghrelin表达量均比对照组高，差异具有统计学显著性(P<0.01)；CDH组和无CDH组间差异无统计学显著性；Dex组胎肺Ghrelin表达量较CDH组有明显降低(P<0.01)。 3.免疫组织化学检测对各组的4个标本进行免疫组化检测，结果显示Ghrelin免疫阳性细胞主要分布在支气管上皮，细胞核与细胞质均呈阳性。其表达丰度在正常对照组和CDH组都是随着胎龄的增加而减少，在我们所研究的3个胎肺发育时段(17.5，19.5，21.5天胎龄)CDI{组的表达丰度均较对照组高。Dex治疗组的表达丰度高于正常对照组低于CDH组。 结论: 1.Ghrelin在正常大鼠不同发育时期胎肺中的表达水平不同。Ghrelin在胎肺中的表达量与胎肺发育的成熟度有关。在胎肺发育早期(大鼠15.5天胎龄，相当于肺发育的假腺管期)其表达水平较高，随胎龄增加胎肺逐渐发育成熟其表达量下降。 2.Ghrelin在CDH大鼠不同发育时期胎肺中的表达曲线与对照组的相似，但其表达量较同龄正常大鼠明显增高，特别在出生前其表达量仍较对照组高。可能是CCH组胎肺发育滞留在不成熟期的原因造成的，与CDll大鼠胎肺中神经内分泌细胞的数量增加有关。 3.Dex可下调Ghrelin在CDH大鼠胎肺中的表达水平，结合上述结论推测，这可能是因为Dex促进了胎肺的发育成熟而引起的，但其机制尚待进一步研究。 4.Ghrelin 在胎肺中的表达水平高是胎肺发育较早期不成熟表现，其表达水平可以作为评价胎肺成熟度的指标。