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研究目的及意义:反复呼吸道感染是儿科的常见病及多发病,且发病率呈逐年上升趋势,若不及时治疗会影响小儿的生长发育及身心健康,严重者会引起各种并发症甚至死亡。反复呼吸道感染的发病机制尚不明确,目前多认为是小儿陷入了“感染-免疫疲惫(免疫紊乱)-感染”的恶性循环,西医治疗反复呼吸道感染时针对病因、补充微量元素和免疫调节剂等药物,但效果并不确切。中医在治疗本病时有着显著的优势,各代医家认为非急性感染期是治疗的关键时期,多以补气固表为治则,然导师刘晓萍主任医师在多年的临证经验中总结出经验方参芪颗粒,该方不仅具有气血双补,还具有健脾补肺之效,临床效果良好,这为我们防治反复呼吸道感染提供了新思路。因此,本实验通过香烟烟熏法和番泻叶灌胃法复制肺脾气虚证动物模型成功的基础上应用中药处方参芪颗粒后观察小鼠行为学改变,并通过检测血清中细胞因子IL-2、IFN-γ的变化,从免疫的角度探讨该处方防治反复呼吸道感染非急性感染期的可能作用机制,为参芪颗粒的临床疗效评价提供理论及实验学依据。
研究方法:60只昆明种小鼠适应性喂养3天后,随机分为5组标记,分别为A组:空白组;B组:模型组,C组:玉屏风颗粒组;D组:参芪颗粒高剂量组;E组:参芪颗粒低剂量组。除空白组外不予造模,其余各组均建造肺脾气虚证模型,造模方法采用香烟烟熏法和番泻叶灌胃法,造模10天后观察小鼠的行为学改变,选取符合肺脾气虚证标准的纳入下一步治疗阶段。治疗时,A组和B组小鼠均给予灌胃生理盐水0.2ml/日,2次/日,C组给予玉屏风颗粒溶液灌胃0.2ml/次(4.09g/Kg),2次/日;D组给予参芪颗粒高剂量溶液灌胃0.2ml/次(26.73g/Kg),2次/日;E组给予参芪颗粒低剂量溶液灌胃0.2ml/次(13.36g/Kg),2次/日;每组10只,灌胃治疗20天。观察各组实验小鼠的体重、皮毛、食量、大便情况、精神状态、活动情况等一般情况及存活情况。所有动物治疗结束后腹腔麻醉,眼球取血后经温育、离心等处理后取血液上清液,采用酶联免疫吸附法测定IL-2、IFN-γ的含量,取血后摘取各组小鼠胸腺及脾脏称重。
结果:1.胸腺指数、脾脏指数检测结果:B组小鼠胸腺指数、脾脏指数均低于A组(P<0.01),说明造模成功;与B组比较,C、D、E组均能提高免疫低下小鼠胸腺和脾脏指数(P<0.05),其中以D、E为著(P<0.01);与C组比较,D、E组与之不具有统计学差异(P>0.05);D、E组间比较无统计学差异(P>0.05)。2.血清细胞因子IL-2、IFN-γ检测结果:与A组相比,B组血清中细胞因子IL-2、IFN-γ含量明显降低(P<0.05),表明小鼠免疫功能低下,造模成功;与B组比较,C、D、E组IL-2含量均升高(P<0.05),其中以D、E组升高明显(P<0.01);与B组比较,C、D、E组IFN-γ含量均升高(P<0.01);与C组比较,D、E组中IL-2、IFN-γ含量均升高(P<0.05);D、E组间比较IL-2、IFN-γ含量差异不大(P>0.05)。
结论:1.参芪颗粒对反复呼吸道感染有明显的防治作用,其治疗机制可能是通过刺激免疫器官的活性,提高胸腺指数与脾脏指数来提高免疫功能;通过调整Th1/Th2免疫网络,刺激相关细胞因子的产生,使IL-2、IFN-γ含量升高从而提高小鼠的免疫功能。2.参芪颗粒在治疗反复呼吸道感染肺脾气虚证时优于玉屏风颗粒,为中医药防治小儿反复呼吸道感染提高了新的思路,为其临床应用提供了有力的实验依据。
研究方法:60只昆明种小鼠适应性喂养3天后,随机分为5组标记,分别为A组:空白组;B组:模型组,C组:玉屏风颗粒组;D组:参芪颗粒高剂量组;E组:参芪颗粒低剂量组。除空白组外不予造模,其余各组均建造肺脾气虚证模型,造模方法采用香烟烟熏法和番泻叶灌胃法,造模10天后观察小鼠的行为学改变,选取符合肺脾气虚证标准的纳入下一步治疗阶段。治疗时,A组和B组小鼠均给予灌胃生理盐水0.2ml/日,2次/日,C组给予玉屏风颗粒溶液灌胃0.2ml/次(4.09g/Kg),2次/日;D组给予参芪颗粒高剂量溶液灌胃0.2ml/次(26.73g/Kg),2次/日;E组给予参芪颗粒低剂量溶液灌胃0.2ml/次(13.36g/Kg),2次/日;每组10只,灌胃治疗20天。观察各组实验小鼠的体重、皮毛、食量、大便情况、精神状态、活动情况等一般情况及存活情况。所有动物治疗结束后腹腔麻醉,眼球取血后经温育、离心等处理后取血液上清液,采用酶联免疫吸附法测定IL-2、IFN-γ的含量,取血后摘取各组小鼠胸腺及脾脏称重。
结果:1.胸腺指数、脾脏指数检测结果:B组小鼠胸腺指数、脾脏指数均低于A组(P<0.01),说明造模成功;与B组比较,C、D、E组均能提高免疫低下小鼠胸腺和脾脏指数(P<0.05),其中以D、E为著(P<0.01);与C组比较,D、E组与之不具有统计学差异(P>0.05);D、E组间比较无统计学差异(P>0.05)。2.血清细胞因子IL-2、IFN-γ检测结果:与A组相比,B组血清中细胞因子IL-2、IFN-γ含量明显降低(P<0.05),表明小鼠免疫功能低下,造模成功;与B组比较,C、D、E组IL-2含量均升高(P<0.05),其中以D、E组升高明显(P<0.01);与B组比较,C、D、E组IFN-γ含量均升高(P<0.01);与C组比较,D、E组中IL-2、IFN-γ含量均升高(P<0.05);D、E组间比较IL-2、IFN-γ含量差异不大(P>0.05)。
结论:1.参芪颗粒对反复呼吸道感染有明显的防治作用,其治疗机制可能是通过刺激免疫器官的活性,提高胸腺指数与脾脏指数来提高免疫功能;通过调整Th1/Th2免疫网络,刺激相关细胞因子的产生,使IL-2、IFN-γ含量升高从而提高小鼠的免疫功能。2.参芪颗粒在治疗反复呼吸道感染肺脾气虚证时优于玉屏风颗粒,为中医药防治小儿反复呼吸道感染提高了新的思路,为其临床应用提供了有力的实验依据。