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目的:探讨MCAO(Middlecerebralarteryocclusion)模型大鼠缺血再灌注后,脑疏宁方是否通过MAPK/ERK信号通路对缺血再灌注大鼠神经损伤具有修复和再生作用。
方法:SD雄性大鼠105随机分为正常组、假手术组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组及阳性对照组,每组15只。适应性饲养后采用大脑中动脉梗塞(MCAO)1.5h再灌注24小时方法制备模型。
1.通过各组之间神经功能评分、脑组织含水量测定鉴定模型是否成功。
2.对分组大鼠进行药物干预21天。
3.分别于造模后第1天、第7天、第14天及第21天进行角实验与平衡木实验,检测脑疏宁方对模型大鼠感觉与运动能力的影响,造模后第7天与第21天进行Morris水迷宫测试,检测脑疏宁方对模型大鼠学习记忆能力的影响。
4.干预结束、Morris水迷宫测试完成后对实验大鼠处死取脑,剥离海马组织,进行WesternBlot检测Erk1/2、Raf及p-Raf蛋白的表达,Real-timeqPCR检测Erk1/2、Raf及p-Raf基因表达。
结果:
实验一:神经功能缺损评分正常组与假手术组评分0分,模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,阳性组组间神经功能缺损评分p>0.05,统计学无明显差异性。
TTC染色及脑梗死面积比正常组与假手术组无梗死,模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组及阳性组有不同程度脑梗死,脑梗死面积依据ImageJ图像处理软件对梗死区域面积进行测算,并计算出梗死面积占大脑组织总面积的百分比,梗死面积百分比之间p>0.05,统计学无明显差异性。
角实验与平衡木实验低剂量组、中剂量组、高剂量组及阳性组与模型组比较,脑疏宁方组可以使模型大鼠的感觉及运动能力恢复,并且其运动与感觉能力的恢复呈剂量相关。
Morris水迷宫实验对模型大鼠进行Morris水迷宫实验检测学习与记忆能力,模型组与脑疏宁方组比较,干预后脑疏宁方组学习记忆能力明显增强,且呈剂量相关。
实验二:WesternBlot检测大鼠海马区Erk1、Raf及p-Raf脑疏宁方使Erk1、Raf及p-Raf蛋白表达量降低而对Erk2蛋白表达量的变化影响不明显。
Real-timeqPCR检测大鼠海马区ERK1/2和Raf脑疏宁方使大鼠海马区ERK1/2和Raf的基因表达量升高。
结论:
1.脑疏宁方在改善缺血再灌输后大鼠神经功能的损伤方面具有显著的效果。
2.脑疏宁方可以使Erk1/2、Raf及p-Raf蛋白表达量降低。
3.脑疏宁方可以使Erk1/2和Raf的基因表达升高。
4.脑疏宁方对缺血再灌注损伤引起的神经细胞修复和再生可能与MAPK/ERK信号通路的活化或抑制有关,但需要进一步验证。
方法:SD雄性大鼠105随机分为正常组、假手术组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组及阳性对照组,每组15只。适应性饲养后采用大脑中动脉梗塞(MCAO)1.5h再灌注24小时方法制备模型。
1.通过各组之间神经功能评分、脑组织含水量测定鉴定模型是否成功。
2.对分组大鼠进行药物干预21天。
3.分别于造模后第1天、第7天、第14天及第21天进行角实验与平衡木实验,检测脑疏宁方对模型大鼠感觉与运动能力的影响,造模后第7天与第21天进行Morris水迷宫测试,检测脑疏宁方对模型大鼠学习记忆能力的影响。
4.干预结束、Morris水迷宫测试完成后对实验大鼠处死取脑,剥离海马组织,进行WesternBlot检测Erk1/2、Raf及p-Raf蛋白的表达,Real-timeqPCR检测Erk1/2、Raf及p-Raf基因表达。
结果:
实验一:神经功能缺损评分正常组与假手术组评分0分,模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,阳性组组间神经功能缺损评分p>0.05,统计学无明显差异性。
TTC染色及脑梗死面积比正常组与假手术组无梗死,模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组及阳性组有不同程度脑梗死,脑梗死面积依据ImageJ图像处理软件对梗死区域面积进行测算,并计算出梗死面积占大脑组织总面积的百分比,梗死面积百分比之间p>0.05,统计学无明显差异性。
角实验与平衡木实验低剂量组、中剂量组、高剂量组及阳性组与模型组比较,脑疏宁方组可以使模型大鼠的感觉及运动能力恢复,并且其运动与感觉能力的恢复呈剂量相关。
Morris水迷宫实验对模型大鼠进行Morris水迷宫实验检测学习与记忆能力,模型组与脑疏宁方组比较,干预后脑疏宁方组学习记忆能力明显增强,且呈剂量相关。
实验二:WesternBlot检测大鼠海马区Erk1、Raf及p-Raf脑疏宁方使Erk1、Raf及p-Raf蛋白表达量降低而对Erk2蛋白表达量的变化影响不明显。
Real-timeqPCR检测大鼠海马区ERK1/2和Raf脑疏宁方使大鼠海马区ERK1/2和Raf的基因表达量升高。
结论:
1.脑疏宁方在改善缺血再灌输后大鼠神经功能的损伤方面具有显著的效果。
2.脑疏宁方可以使Erk1/2、Raf及p-Raf蛋白表达量降低。
3.脑疏宁方可以使Erk1/2和Raf的基因表达升高。
4.脑疏宁方对缺血再灌注损伤引起的神经细胞修复和再生可能与MAPK/ERK信号通路的活化或抑制有关,但需要进一步验证。